“做miRNA下調，QPCR檢測miRNA，表達水平無變化”如何解決呢？反義核酸是在轉錄后水平發揮功能，要阻斷miRNA的產生，理想情況是在生成成熟的miRNA之前阻斷。此要求目前唯有CRISPR / Cas9能實現，Cas9通過在pre-miRNA序列中引入突變，從而破壞miRNA表達，是miRNA基因功能缺失研究的一種新方法。福建肖老師運用Cas9技術，針對miR-21基因設計sgRNA ，通過慢病毒遞送細胞，并在RNA水平檢測到mir-21的下調表達，從而研究出miR-21耗竭對CNE2鼻咽（NPC）細胞生物學特性及其潛在機制的影響。使用Cas9敲除miR-21之后，功能上也呈現出陽性，此外，溫醫大醫院的張老師使用Cas9敲除mir-545，研究了人環狀RNA PRKCI（circPRKCI）通過抑制miR-545顯示致性，促進人類神經膠質瘤細胞的病理進展3。所以，CRISPR / Cas9對于miRNA的KO是有效的、被認可的、且以QPCR檢測表達量完全沒有問題。瑞普信生物技術有限公司第三方檢測數據靠譜嗎？血常規第三方檢測報告

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    ③待分離膠完全聚合后，傾去其頂部的去離子水，用濾紙將水吸干。④配制4％濃縮膠5mL，加TEMED5μL、10％APS50μL，混勻立即灌膠，灌至頂部，并垂直插入Teflon齒梳，室溫靜置20min待膠聚合。⑤待膠完全聚合后拔出梳子，將凝膠置于電泳槽中，加入電泳緩沖液，用電泳緩沖液沖洗上時間就是金錢，效率就是生命唯有惜時才能成功，唯有努力方可成就樣孔以去除氣泡。2電泳①取各個處理組蛋白提取液，調整蛋白濃度為6μg/μL，和等體積2上樣緩沖液混合，即為上樣液。②將上樣液于100℃沸水中煮沸5min，使蛋白變性，冰上驟冷，3000轉/min離心1min。③每孔加上樣液15μL，留一孔加10μL預染的Marker。加滿電泳緩沖液，蓋上槽蓋，接通電源，先用80v恒壓電泳，約20min，當指示劑溴酚藍進入分離膠后改用110v恒壓電泳，當指示劑到達距凝膠下端約處時關閉電源，取出膠板。3轉印蛋白及免疫檢測①在電泳即將結束前，預先將PVDF膜浸泡在甲醇中15s，然后用ddH2O漂洗2min，浸泡于轉移緩沖液中5min后開始后續操作。②在水中撬膠，修膠后將膠浸泡于轉移緩沖液中平衡15min。③按黑面（負極）→海綿→濾紙→膠→PVDF膜→濾紙→海綿→紅面（正極）的順序制備轉膜“三明治”。瑞普信生物技術有限公司專業的第三方檢測Western Blot。

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