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甘肅抗體第三方檢測中心

來源: 發布時間:2023-03-13

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磷酸化蛋白的WB第三方檢測有哪些方法呢?50 度水浴 30min 后,用 TBST 洗 5 分鐘 ,3 次即可去除已孵育結合的抗體。許多人會建議 55 度水浴 30min。Strip solution 是用來去除已結合的抗體,但也會去除部分的蛋白,導致蛋白信號變弱。我本人經實驗發現水浴時有時溫度不穩定,溫度定為 55 度時往往其溫度容易超過,導致較多的蛋白也被去除,故建議溫度設為 50 度 30min ,既能有效去除已結合的抗體,又比 55 度更能保護蛋白。Strip 時一定要注意: membrane 一定要完全泡在 strip solution 中(可用較硬的塑料膜封好),然后要完全浸入水中,使受熱均勻 。這一點很重要,要不然,隨后壓出來的總蛋白也好,內標也好就會不均一,無法進行比較。我曾將同一張membrane 用我提供的方法 strip 了 3 次,分別壓不同的抗體(因為有時候蛋白分子量很接近),效果都不錯。甘肅熒光定量第三方檢測瑞普信生物技術有限公司專業的第三方檢測ELISA。

磷酸化蛋白的WB第三方檢測在實操過程中有哪些注意事項?細節決定成敗,在科研中更是如此。1.一定要在lysisbuffer中加入蛋白酶抑制劑,還要加入一定量的磷酸酶抑制劑,否則即使band壓出來也會很淺,結果也不可信。2.加一抗后比較好4度過夜,保證抗體有充分的結合時間。因為磷酸化的蛋白只占總的蛋白量的極少部分。二抗則室溫1小時即可。3.磷酸化抗體的好壞是一個關鍵因素,所以要選擇好的廠商。務必找專業的磷酸化抗體公司訂購。4.比較好根據廠商的protocol來操作實驗,這是實驗成功的保證。5.抗體的稀釋倍數也要適當。不同廠商也會有不同要求。

WB第三方檢測對于提供的樣本有什么要求?請提供的細胞數量保證5x106或更多,動物組織至少200mg以上,植物組織1g以上,須在取材后(比較好經液氮速凍)保存于-80℃,干冰運輸。取材時需盡量避免較多血液、泥土等干擾保留在材料表面,可用生理鹽水等迅速清洗后速凍。檢測抗體數量增多時樣本質量須隨之增加。WB第三方檢測實驗中一抗使用量需要多少?為什么有時目的條帶大小同理論預期分子量有偏差?當條帶所示的實際大小同理論有偏差時,可能由以下一些原因導致:蛋白發生如磷酸化、糖基化等翻譯后修飾時條帶會上移,蛋白發生剪切(如前體)時條帶會下移,蛋白存在不同的可變剪切體或亞型,強相互作用大分子存在時變性不徹底。此外,WB實驗中使用的預染蛋白marker由于攜帶染料程度不穩定的原因,也可能導致表觀分子量與理論預期出現偏差。瑞普信靠譜第三方檢測WB,QPCR,ELISA,細胞實驗。

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