GSDME全長蛋白在切割前是沒有活性的，N端和C端結構域之間的分子內相互作用調控自抑制。caspase-3可以將全長GSDME，剪切成有活性的N端（包含1-270a段的GSDME-N）和C端（GSDME-C）。如果需檢測到N端或者C端的GSDME片段，細胞通常需要誘導處理。在檢測GSDME全長時需注意，其表達水平因樣品類型（組織和細胞）而異，可能在部分組織和細胞株系表達，其表達水平也存在差異，因此需要對樣品處理和WB實驗進行一些優化。建議設置陽性和陰性對照。并且組織樣本成分更復雜，在WB實驗時可能出現多條條帶現象。瑞普信生物技術有限公司電放檢測實驗真實嗎？自貢第三方檢測公司

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“做miRNA下調，QPCR檢測miRNA，表達水平無變化”如何解決呢？反義核酸是在轉錄后水平發揮功能，要阻斷miRNA的產生，理想情況是在生成成熟的miRNA之前阻斷。此要求目前唯有CRISPR/Cas9能實現，Cas9通過在pre-miRNA序列中引入突變，從而破壞miRNA表達，是miRNA基因功能缺失研究的一種新方法。福建肖老師運用Cas9技術，針對miR-21基因設計sgRNA，通過慢病毒遞送細胞，并在RNA水平檢測到mir-21的下調表達，從而研究出miR-21耗竭對CNE2鼻咽（NPC）細胞生物學特性及其潛在機制的影響。使用Cas9敲除miR-21之后，功能上也呈現出陽性，此外，溫醫大醫院的張老師使用Cas9敲除mir-545，研究了人環狀RNAPRKCI（circPRKCI）通過抑制miR-545顯示致性，促進人類神經膠質瘤細胞的病理進展3。所以，CRISPR/Cas9對于miRNA的KO是有效的、被認可的、且以QPCR檢測表達量完全沒有問題。自貢第三方檢測公司

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