骨組織RNA提取方法及步驟：適用于快速提取骨組織細胞總RNA，使用獨有基因組DNA清理柱技術可有效清理電泳可見gDNA殘留，RNA可用于反轉錄PCR，熒光定量PCR等。骨組織堅硬、骨細胞密度低、而且外周基質含有大量黏蛋白（蛋白多糖）和RNA難以分離，無法用傳統Trizol法進行高質量提取。本方法采用獨有的不含苯酚/氯仿配方的裂解液，并添加多種成分去除骨組織蛋白多糖。同時獨特基因組DNA清理柱技術可以有效清理gDNA殘留，得到的RNA一般不需要DNase消化，可用于反轉錄PCR、熒光定量PCR等實驗。獨特的裂解液迅速裂解細胞和滅活細胞RNA酶，離心沉淀去除多糖和次級代謝產物，然后裂解混合物用乙醇調節RNA結合吸附到基因組DNA清理柱，然后RNA被選擇性洗脫濾過，吸附在基因組DNA清理柱上的殘留DNA無法洗脫連同柱子一起丟棄從而清理掉DNA。濾過的RNA用乙醇調節結合條件后，RNA在高離序鹽狀態下選擇性吸附于離心柱內硅基質膜，再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟，去蛋白液和漂洗液將細胞代謝物，蛋白等雜質去除，較后低鹽的RNasefreeH20將純凈RNA從硅基質膜上洗脫。DNA提取需要通過添加蛋白酶消化蛋白質。青島尿液DNA提取純度高

骨組織RNA提取之其它骨組織破碎方法：確保離心后液體全部濾過去，膜上沒有殘留，如有必要，可以加大離心力和離心時間。將基因組DNA清理柱子放在一個干凈2ml離心管內（不用RNAsefree或者DEPC處理，一般干凈的新離心管即可。也可使用RNA吸附柱配套的新的干凈收集管），在基因組清理柱內加500μl裂解液RLTPlus，13,000rpm離心30秒，收集濾液（RNA在濾液中），用微量移液器較精確估計濾過液體積（通常為450-500μl左右，濾過時候損失體積應該減去），加入0.5倍體積的無水乙醇，此時可能出現沉淀，但是不影響提取過程，立即吹打混勻，不要離心。青島尿液DNA提取純度高RNA提取通常用于研究基因表達或RNA的功能。

RNA提取和DNA提取實驗中常見問題及過程中的注意事項：RNA提取和DNA提取實驗在分子生物學中比較常用，但有時會出現產量低、純度低、易降解等情況，RNA提取和DNA提取實驗中常見問題：產量低：如果您遇到的DNA/RNA產量低于您對樣品的預期，則需要考慮許多因素。通常，這是一個裂解問題。不完全裂解是產量低的主要原因。它也可能是由不正確的綁定條件引起的。確保使用新鮮的好的乙醇（100%200標準）稀釋緩沖液或添加到結合的步驟。劣質乙醇或舊庫存可能已經吸收了水分，并且濃度不正確。如果洗滌緩沖液制備不正確，您可能正在洗掉提取的DNA或RNA。

RNA提取的一些問題，RNA降解：提取的材料不新鮮。新鮮組織取得后應立即置于液氮中或立即放入RNAstore試劑中，以保證提取效果。處理樣品量過大。污染了RNase。雖然試劑盒中提供的緩沖液都不含RNase，但使用過程中很容易污染RNase，應小心操作。堿裂解法提取的質粒DNA進行瓊脂糖電泳進行鑒定時，看到的三條帶分別是什么？堿法抽提得到質粒樣品中不含線性DNA，得到的三條帶是以電泳速度的快慢排序的，分別是超螺旋、開環和復制中間體（即沒有復制完全的兩個質粒連在了一起）。如果你不小心在溶液II加入后過度振蕩，會有第四條帶，這條帶泳動得較慢，遠離這三條帶，是20-100kb的大腸桿菌基因組DNA的片斷。DNA提取的樣品準備之生物組織：液氮冷凍敲碎研磨。

核酸提取，是分子生物學中較常見的基本操作，一般分為DNA提取與RNA提取，提取核酸的質量直接影響后續的檢測工作，暫對常見的問題進行了一個總結。DNA提取：1.A260/280比值較低？或者A260/280比值較高？用水作為洗脫液比較偏低，或者蛋白質殘留，但如果操作過程中使用了苯酚，則更可能是苯酚殘留。而比較高可能是大量RNA殘留，沒有使用RNaseA，或RNaseA活性下降。A260值提示的含量與電泳檢測時提示的含量有可見的誤差則為苯酚殘留。DNA提取的質量可以通過測定純度、濃度和完整性來評估。青島尿液DNA提取純度高

DNA提取的原則，保證核酸一級結構的完整性。青島尿液DNA提取純度高

動物組織塊DNA提取：1．組織塊解凍，用生理鹽水洗去血污，剪取約0.5g組織，放入1.5ml離心管中，剪碎。2．加入0.45mlTES混勻，再加入50ulSDS（10%），5.0ul蛋白酶K（20mg/ml），充分混勻后，于56°C保溫4-6h，每2h搖1次。3．放置到室溫，加入等體積飽和酚（500ul），顛倒混勻，10000r/m，離心10m，分離水相和有機相，小心吸取上層含核酸的水相，到一個新的1.5ml離心管。4．加入等體積酚：氯仿：異戊醇（25：24：1），顛倒混勻，10000r/m，離心10分鐘，取上層轉移到新的1.5ml離心管中。5．加入等體積氯仿：異戊醇（24：1），顛倒混勻，10000r/m，離心10分鐘，取上層清液到一個新的1.5ml離心管。6．加入2.5倍體積的-20°C預冷的無水乙醇沉淀DNA，觀察現象。7．12000r/m，離心10分鐘，棄乙醇。8．-20°C保存的75%乙醇洗滌，10000r/m，離心5分鐘，去乙醇，55°C干燥DNA。9．加入適量TE溶解DNA（具體依DNA的多少而定），-20°C保存備用。青島尿液DNA提取純度高

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