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單細(xì)胞測序技術(shù)(Single Cell Sequencing)從一種新興的研究角度,借助已有的高通量測序手段,幫助研究者在樣本中細(xì)胞的異質(zhì)性、免疫微環(huán)境、發(fā)育學(xué)、免疫學(xué)以及其他領(lǐng)域中進行單細(xì)胞層面的數(shù)據(jù)解析,解決了Bulk Population Sequencing所無法解決的問題。這樣一個新的研究領(lǐng)域必然也需要足夠可靠的實驗手段來支撐。BD Rhapsody單細(xì)胞分選系統(tǒng)為此提供了完善的硬件設(shè)備,保證了從單細(xì)胞懸液質(zhì)量評估到單細(xì)胞分選標(biāo)記過程中每一個實驗步驟的準(zhǔn)確質(zhì)控。NovelBio單細(xì)胞實驗團隊借助BD Rhapsody單細(xì)胞分選系統(tǒng),在實驗實施層面對單細(xì)胞測序結(jié)果的可靠性提供了強有力的保證。繼單細(xì)胞懸液制備之后,又在另一道關(guān)鍵關(guān)卡提供了可靠的支持,幫助研究者在單細(xì)胞測序領(lǐng)域收獲更多的成果。十二年測序經(jīng)驗,累計服務(wù)與5000余項重要科研項目。天津10X單細(xì)胞測序商業(yè)化服務(wù)
單細(xì)胞RNA-seq、RNA-seq和逆轉(zhuǎn)錄qPCR(RT-qPCR)都采用一個共同過程,即分離RNA并將其轉(zhuǎn)化為cDNA進行分析。不過,每種分析在開展方式和獲得的數(shù)據(jù)上有所不同。RNA-seq和RT-qPCR都是先從大量細(xì)胞中分離RNA,然后將其轉(zhuǎn)化為cDNA。RNA-seq是使用cDNA來構(gòu)建新一代測序文庫,從而測定整個轉(zhuǎn)錄組的基因表達。RT-qPCR則是從cDNA中擴增特定靶點,并通過熒光測定表達水平。RT-qPCR限于已知靶點,而RNA-seq可實現(xiàn)無偏倚的全轉(zhuǎn)錄組基因表達分析。然而,這兩者只能提供細(xì)胞群體內(nèi)基因表達的平均情況。單細(xì)胞RNA-seq則在分離RNA之前將單細(xì)胞分離到微孔或單個微反應(yīng)容器中。然后用細(xì)胞特異性的條形碼標(biāo)記RNA,確保來自每個細(xì)胞的cDNA可以追溯到起源細(xì)胞。與RNA-seq相似,帶有條形碼的cDNA也被用于構(gòu)建新一代測序文庫,從而能夠?qū)γ總€細(xì)胞的整個轉(zhuǎn)錄組進行基因表達測定。淄博單細(xì)胞測序烈冰科技成立10余年,為科研學(xué)者提供專注的測序數(shù)據(jù)分析服務(wù)。
單細(xì)胞多組學(xué)提升見解 基于測序的數(shù)據(jù)能夠?qū)⒄蔑@其強大之處,因為它能夠了解同一單細(xì)胞的多種生物分析指標(biāo)。如果說單細(xì)胞基因表達提供了一種顏色的詳細(xì)信息,那么單細(xì)胞多組學(xué)提供了同一細(xì)節(jié)的全彩色圖譜,為您帶來樣本的真實視圖。烈冰2021年強勢引進的10x Genomics Chromium單細(xì)胞平臺能夠從同一單細(xì)胞中讀取細(xì)胞復(fù)雜性的多組學(xué)特征。與傳統(tǒng)方法不同,單細(xì)胞多組學(xué)簡化了您需要開展的實驗,也節(jié)省了您需要分析的樣本,而能獲得相同的結(jié)果。這不但節(jié)省了寶貴的樣本,還保證了更高的生物學(xué)準(zhǔn)確性,因為您不需要匹配拆分樣本的數(shù)據(jù)集并通過計算來推斷各個組學(xué)之間的關(guān)系。
科技的發(fā)展讓單細(xì)胞測序已經(jīng)應(yīng)用于疾病發(fā)展過程中的關(guān)鍵過程和事件,如前病變向惡性的轉(zhuǎn)化、惡性向轉(zhuǎn)移性的發(fā)展,以及對多種用藥的反應(yīng)。單細(xì)胞測序技術(shù)作為一個需要將組織解離成為單細(xì)胞懸液,或者是采用細(xì)胞核捕獲的策略捕獲單細(xì)胞核,進而對于每一個單細(xì)胞或者細(xì)胞核進行測序得到結(jié)果的技術(shù),其空間定位信息是丟失的。這就衍生出了一個問題就是如果單細(xì)胞A與B并不出現(xiàn)在一個組織區(qū)域中他們會互相影響或者轉(zhuǎn)化么?免疫研究中,兩個具有非常強的PDL1-PD1的配對關(guān)系的細(xì)胞在組織切片上風(fēng)馬牛不相及,這樣PDL1-PD1的關(guān)系會生效么?烈冰生物為您提供多平臺一站式全流程單細(xì)胞測序服務(wù)。
10X Genomics 是一種基于 drop 的微流控技術(shù),液體在配套芯片中的微管道中流動,因此細(xì)胞直徑會受到芯片中微管道直徑的限制,微流體通道的直徑約為 50 ~ 60 um,因此捕獲細(xì)胞的直徑不能超過 40um。當(dāng)細(xì)胞直徑過大時,容易出現(xiàn)管道堵塞,造成GEM生成失敗,對于神經(jīng)科學(xué)研究和心血管疾病研究的老師而言,準(zhǔn)備采用單細(xì)胞技術(shù)用于課題研究的時候,往往會遇到一個尷尬的問題,就是目標(biāo)細(xì)胞,例如神經(jīng)元細(xì)胞、成熟心肌細(xì)胞由于體積過大,不適用于 10X 單細(xì)胞技術(shù)。其中神經(jīng)元細(xì)胞的直徑很大,直接超過了芯片中管道的直徑,雖然心肌細(xì)胞直徑低于 50um,但是成熟心肌細(xì)胞的長度很長,有可能堵塞通道造成實驗失敗,這也是為什么現(xiàn)在很多已發(fā)表的心臟單細(xì)胞文章,主要研究方向是心臟發(fā)育的原因了,主要還是因為未發(fā)育成熟的心肌細(xì)胞比較小,不會出現(xiàn)堵塞管道的風(fēng)險。因此可以考慮組織解離后過 40um 濾網(wǎng),過濾掉大細(xì)胞,避免出現(xiàn)管道堵塞、實驗失敗的風(fēng)險。此種方案的缺點是大細(xì)胞被過濾掉,丟失相關(guān)細(xì)胞數(shù)據(jù);另外組織解離獲得高質(zhì)量細(xì)胞懸液以后,繼續(xù)做細(xì)胞裂解抽細(xì)胞核,開展細(xì)胞核測序。具體可訪問烈冰官網(wǎng)給我們留言,烈小冰將安排專業(yè)技術(shù)為您詳細(xì)解答。附加流式分選細(xì)胞表面Marker,對于較低分辨率的標(biāo)志物也能有效鑒定,助力高要求測序項目。南京二代測序單細(xì)胞測序服務(wù)機構(gòu)
烈冰全線實驗平臺滿足超深度、大規(guī)模發(fā)現(xiàn)和復(fù)雜疾病研究的測序。天津10X單細(xì)胞測序商業(yè)化服務(wù)
一味的追求高細(xì)胞數(shù)量的捕獲,小心得不償失,原因在這:單細(xì)胞測序所有的分析都是基于細(xì)胞聚類進行,而細(xì)胞聚類是在區(qū)分cell和non-cell后,獲得細(xì)胞基因表達譜,通過降維(pca),無監(jiān)督聚類以及可視化(t-SNE)得到的。進行細(xì)胞聚類時需要考慮到每個細(xì)胞的基因表達模式,因此即使是相同的數(shù)據(jù),在剔除幾個細(xì)胞的情況下,前后獲得的聚類圖也會出現(xiàn)明顯不同。而當(dāng)細(xì)胞捕獲數(shù)過多時,無論是假陰性和假陽性數(shù)據(jù)還是多細(xì)胞數(shù)據(jù),都會對正常細(xì)胞聚類產(chǎn)生影響,造成聚類結(jié)果失真。這也是很多文章,特別是很多高分文章,為什么單個樣本捕獲細(xì)胞數(shù)在2000-3000的原因了。烈冰建議單個樣本捕獲細(xì)胞數(shù)在3000-5000個時,數(shù)據(jù)量在100G左右時,可以滿足分析和文章發(fā)表的多重需求。天津10X單細(xì)胞測序商業(yè)化服務(wù)
上海烈冰生物醫(yī)藥科技有限公司主營品牌有NovelBio,烈冰生物,NovelBrain,PanoCell,烈冰智造,發(fā)展規(guī)模團隊不斷壯大,該公司服務(wù)型的公司。是一家有限責(zé)任公司(自然)企業(yè),隨著市場的發(fā)展和生產(chǎn)的需求,與多家企業(yè)合作研究,在原有產(chǎn)品的基礎(chǔ)上經(jīng)過不斷改進,追求新型,在強化內(nèi)部管理,完善結(jié)構(gòu)調(diào)整的同時,良好的質(zhì)量、合理的價格、完善的服務(wù),在業(yè)界受到寬泛好評。公司擁有專業(yè)的技術(shù)團隊,具有單細(xì)胞測序,生物大數(shù)據(jù)云分析平臺,空間轉(zhuǎn)錄組測序,單細(xì)胞多組學(xué)測序等多項業(yè)務(wù)。烈冰生物自成立以來,一直堅持走正規(guī)化、專業(yè)化路線,得到了廣大客戶及社會各界的普遍認(rèn)可與大力支持。