關于單細胞測序實驗樣本制備，這與流式細胞術用戶熟悉的步驟完全一致，也就是通過酶促或機械消化、細胞分選或其他細胞分離技術從整個樣本中制備生成活的單細胞懸液。隨后是細胞計數和質量控制步驟，以確保您的樣本有適當濃度的活細胞，并且不含細胞團塊和死細胞碎片。如有必要，您還可以使用抗體對樣本進行染色，標記細胞表面蛋白或其他生物分析物，或者通過FACS來富集感興趣的細胞類型。解離樣本時采取的具體步驟將根據您的起始材料和實驗目標而定。也許需要額外的制備步驟，具體取決于組織質量、樣本豐度、細胞大小，以及是否需要提取出細胞核進行染色質可接近性分析。無論具體的考慮因素如何，所有樣本類型都遵循同一個基本原則，那就是生成高質量的單細胞懸液。單細胞測序因其強大的探究疾病--細胞--基因的關系，一度成為高通量測序技術的“天花板”。沈陽單細胞測序技術支持

10× Genomics官方建議，當單細胞懸液活性低于70%時應做去除死細胞操作，并推薦使用MACS? Dead Cell Removal Kit(Miltenyi Biotec)。需要注意到，去除死細胞的操作會損失一定的細胞數量，10× Genomics和Miltenyi Biotec都沒有給出單細胞懸液含有多少細胞數量才建議做去除死細胞的操作。基于烈冰多年單細胞測序實驗經驗，建議當細胞懸液進行質量和活性檢測后，考慮對細胞活性在50%-70%的懸液進行去除死細胞的操作。而太低活性的懸液（小于30%），懸液中細胞大量死亡，可能已經丟失了原組織內的細胞比例和狀態，失真嚴重，建議重新收集樣本進行新的實驗，保證數據的高質量和實驗結果的準確性。成都10X Genomics單細胞測序數據分析可視化烈冰單細胞測序，助力您的深入科學探究。

一味的追求高細胞數量的捕獲，小心得不償失，原因在這：單細胞測序所有的分析都是基于細胞聚類進行，而細胞聚類是在區分cell和non-cell后，獲得細胞基因表達譜，通過降維（pca），無監督聚類以及可視化（t-SNE）得到的。進行細胞聚類時需要考慮到每個細胞的基因表達模式，因此即使是相同的數據，在剔除幾個細胞的情況下，前后獲得的聚類圖也會出現明顯不同。而當細胞捕獲數過多時，無論是假陰性和假陽性數據還是多細胞數據，都會對正常細胞聚類產生影響，造成聚類結果失真。這也是很多文章，特別是很多高分文章，為什么單個樣本捕獲細胞數在2000-3000的原因了。烈冰建議單個樣本捕獲細胞數在3000-5000個時，數據量在100G左右時，可以滿足分析和文章發表的多重需求。

10X Genomics和Drop-Seq具有類似的技術原理。從橫向孔道中逐一輸入凝膠微珠，一列縱向孔道輸入細胞，凝膠微珠與細胞碰撞后會吸附在凝膠微珠上，并通過微流控技術，將之輸入到第二縱向孔道，即油相孔道中。這時候，就形成了一個個油滴并輸出并收集在EP管中。每一個油滴中會落入一個細胞以及一個凝膠微珠，那么在每一個凝膠微珠中上長滿了不同的Cell Barcode和UMI Barcode連接形成的序列，再加上一端PolyT的抓手，構成我們的捕獲凝膠微珠。而這個凝膠微珠抓手就會使用oligo dT抓住mRNA構建文庫。烈冰生物為您提供多平臺一站式全流程單細胞測序服務。

針對單細胞測序數據分析時的reads數、基因表達量及細胞數量判定過程中：以捕獲5000個細胞、100G的測序量為標準，每個細胞的reads數大約在50k左右；每個細胞的基因中位數取決于樣本的細胞類型，例如成熟的B，T，粒細胞數量較多的組織中，由于該類型細胞表達的基因數普遍較少，導致基因中位數下降。而某些疾病組織、或者體外培養的如干細胞等，他們的基因表達數較高，甚至可以超過1W，這就導致該類樣本基因中位數非常高。因此，我們對細胞數量以及基因中位數確認時，需要考察實際組織的細胞組成。深度的單細胞測序數據解讀助力醫療健康大時代。廣州10X單細胞測序數據分析可視化

烈冰單細胞多組學測序助您探究細胞類型特異性和基因調控網絡特征。沈陽單細胞測序技術支持

作為單細胞測序的一個重要里程碑，10x genomic公司于2016年2月推出10x Chromium Single Cell Gene Expression Solution，此平臺整合了儀器、試劑盒和信息學軟件，能精確對接illumina測序儀，因此可實現大量大細胞的快速高效標記、測序和分析，獲得單細胞水平的基因表達譜和差異情況，并通過對復雜細胞群體進行深入細致分析，繪制大規模單細胞表達圖譜。 以量化細胞內的群體異質性，并逐個鑒定細胞類型、細胞狀態和動態細胞躍遷。除了有望鑒定新的細胞亞型和稀有細胞群體，單細胞技術還能更好地了解轉錄動態和基因調控關系。沈陽單細胞測序技術支持

上海烈冰生物醫藥科技有限公司致力于醫藥健康，以科技創新實現***管理的追求。烈冰生物作為生物科技、醫藥科技、信息科技、計算機科技領域內的技術開發、技術服務、技術轉讓、技術咨詢，市場營銷策劃，市場信息咨詢與調查（不得從事社會調查、社會調研、民意調查、民意測驗），從事貨物及技術的進出口業務，計算機、軟件及耗材（除專控），軟件開發【依法須經批準的項目，經相關部門批準后方可開展經營活動】的企業之一，為客戶提供良好的單細胞測序，生物大數據云分析平臺，空間轉錄組測序，單細胞多組學測序。烈冰生物致力于把技術上的創新展現成對用戶產品上的貼心，為用戶帶來良好體驗。烈冰生物始終關注醫藥健康行業。滿足市場需求，提高產品價值，是我們前行的力量。