對于單細(xì)胞測序而言，常常需要先構(gòu)建細(xì)胞圖譜，在此基礎(chǔ)上再開展后續(xù)各項(xiàng)分析，并且數(shù)據(jù)分析時(shí)以細(xì)胞聚類（cell cluster）為討論對象，而不是像常規(guī)Bulk測序一樣以組別為分析對象，因此單細(xì)胞測序項(xiàng)目對樣本入組要求沒有Bulk測序那樣嚴(yán)格，但是單細(xì)胞測序，特別是目的為圖譜研究時(shí)，需要通過提高樣本復(fù)雜度（增加樣本數(shù)），盡可能的構(gòu)建某一疾病類型、群體細(xì)胞圖譜信息。因此，單細(xì)胞測序?qū)嶒?yàn)設(shè)計(jì)時(shí)首先需要保證生物學(xué)重復(fù)，不同樣本來源的樣本建議單獨(dú)進(jìn)行細(xì)胞解離和捕獲、建庫、測序，以保證捕獲到足夠的細(xì)胞數(shù)，單個(gè)樣本分別捕獲細(xì)胞時(shí)，后續(xù)分析除了整體分析以外，還可以做單樣本分析，保證分析的完備準(zhǔn)確性。烈冰實(shí)驗(yàn)室包含從樣本處理到測序下機(jī)的全套實(shí)驗(yàn)平臺。天津BD單細(xì)胞服務(wù)機(jī)構(gòu)

作為單細(xì)胞測序的又一個(gè)重要里程碑，BD Rhapsody單細(xì)胞捕獲平臺整合了儀器、試劑盒和基礎(chǔ)信息學(xué)軟件，能精確對接illumina測序儀，因此可實(shí)現(xiàn)大量大細(xì)胞的快速高效標(biāo)記、測序和分析，獲得單細(xì)胞水平的基因表達(dá)譜和差異情況，并通過對復(fù)雜細(xì)胞群體進(jìn)行深入細(xì)致分析，繪制大規(guī)模單細(xì)胞表達(dá)圖譜。 以量化細(xì)胞內(nèi)的群體異質(zhì)性，并逐個(gè)鑒定細(xì)胞類型、細(xì)胞狀態(tài)和動態(tài)細(xì)胞躍遷。除了有望鑒定新的細(xì)胞亞型和稀有細(xì)胞群體，單細(xì)胞技術(shù)還能更好地了解轉(zhuǎn)錄動態(tài)和基因調(diào)控關(guān)系。云南BD VDJ單細(xì)胞多組學(xué)測序截至2022年6月，烈冰助力發(fā)表單細(xì)胞測序文章30+篇。

針對單細(xì)胞測序的細(xì)胞上樣數(shù)，為什么不建議捕獲到的細(xì)胞數(shù)量越高越好？一味地追求高數(shù)量的細(xì)胞捕獲可能會存在一些問題。例如在上機(jī)細(xì)胞懸液濃度固定時(shí)，如果目標(biāo)細(xì)胞捕獲數(shù)增加到8000甚至10000，上樣細(xì)胞懸液體積勢必增加，在細(xì)胞懸液質(zhì)量不是很理想（細(xì)胞活性<90%、碎片率>5%、結(jié)團(tuán)率均>5%）的情況下，引入的背景信號會增加，分析結(jié)果不理想的直接體現(xiàn)包括：cell、non-cell無法有效區(qū)分和Fraction reads in cells偏低。當(dāng)cell和non-cell無法有效區(qū)分時(shí)，會使得數(shù)據(jù)出現(xiàn)假陽性和假陰性結(jié)果！當(dāng)目標(biāo)細(xì)胞捕獲數(shù)很大時(shí)，多細(xì)胞率會增加，數(shù)據(jù)分析時(shí)，此部分“cell”表現(xiàn)為基因檢測數(shù)和UMI檢測數(shù)是正常cell的N倍（N是一個(gè)GEM包裹的細(xì)胞數(shù)），導(dǎo)致所有細(xì)胞的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)（單個(gè)細(xì)胞基因檢測中位數(shù)、單個(gè)細(xì)胞UMI檢測中位數(shù)）虛高。此部分“cell”雖然可以通過設(shè)置數(shù)據(jù)分析閾值進(jìn)行過濾，但是容易會有此類數(shù)據(jù)的殘留和正常高基因檢測細(xì)胞的人為去除！

烈冰生物單細(xì)胞測序服務(wù)，為您提供可視化質(zhì)控系統(tǒng)，保證每次實(shí)驗(yàn)的可靠性：BD Rhapsody 掃描儀具有直接成像功能，可在工作流程的不同階段進(jìn)行質(zhì)量控制，如細(xì)胞捕獲率和細(xì)胞多態(tài)率（雙細(xì)胞率）。成像儀指標(biāo)可以確認(rèn)起始細(xì)胞樣本的質(zhì)量，并確認(rèn)微孔板工作流程中每個(gè)步驟的成功完成狀態(tài) ；在細(xì)胞裂解前的步驟中評估細(xì)胞活性；并對通過測序確定的細(xì)胞回收量進(jìn)行可靠估算。利用這些信息，在進(jìn)行高成本的下游測序之前，用戶可根據(jù)需要改變方向并解決實(shí)驗(yàn)中遇到的問題。這些指標(biāo)允許用戶對不同工作日間的或者不同研究中心間的工作流程性能進(jìn)行跟蹤。烈冰BD Rahpsody單細(xì)胞測序平臺，助力您的深入科學(xué)探究。

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附加流式分選細(xì)胞表面Marker，對于較低分辨率的標(biāo)志物也能有效鑒定，助力高要求測序項(xiàng)目。天津BD單細(xì)胞服務(wù)機(jī)構(gòu)

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