二代測序技術在測序方法上取得了重大突破，基于“邊合成邊測序”（sequencing by synthesis）和大規模平行測序技術（massive parallel analysis,MPS），使測序通量和讀取速度得到極大提升，例如Illumina Solexa測序儀。Illumina的測序原理可以簡化為四步：樣品文庫構建、簇生成、測序和數據分析。由于讀長限制，樣品DNA或由RNA逆轉錄得到的cDNA需要被打斷成300-500bp的片段，并在3'和5'端接上3種序列：1）Index，用于區分樣品來源；2）Adapter，用于結合測序通道上的位點；3）Primer binding site，用于結合PCR引物啟動擴增反應。單細胞測序是高通量測序下的又一重大技術突破。南通單細胞測序服務公司

高通量測序技術（High-throughput sequencing）又稱“下一代”測序技術（“Next-generation” sequencing），以能一次并行對幾十萬到幾百萬條DNA分子進行序列測定和一般讀長較短等為標志。高通量測序技術是對傳統測序一次顛覆性的改變，一次對幾十萬到幾百萬條DNA分子進行序列測定，因此在有些文獻中稱其為下一代測序技術(next generation sequencing)足見其劃時代的改變，同時高通量測序使得對一個物種的轉錄組和基因組進行細致全貌的 分析成為可能，所以又被稱為深度測序(deep sequencing)。而烈冰科技具有專業生物背景和十二年科研服務經驗，已助力Nature，immunity等在內的300+篇CNS文章發表。福州單細胞測序服務烈冰單細胞測序，助力您的深入科學探究。

烈冰科技自主研發的單細胞云平臺致力于幫助每一位客戶定制化分析數據，深度解讀數據分析結果，深入挖掘其背后的生物學意義；從操作便捷、結果可視化、分析可追溯、系統穩定等方面助力單細胞研究，加速科研進程！此外，烈冰生信團隊根據豐富的實戰經驗為用戶量身打造了一款單細胞測序結果解讀的神兵利器——單細胞瀏覽器（SingleCellBrowser），不但可以將海量復雜的結果文件可視化，還是可以實現三維立體化展示的軟件。專業的生信代碼交給專業的烈冰，專業的生物學意義交給專業的您！

對于單細胞測序而言，常常需要先構建細胞圖譜，在此基礎上再開展后續各項分析，并且數據分析時以細胞聚類（cellcluster）為討論對象，而不是像常規Bulk測序一樣以組別為分析對象，因此單細胞測序項目對樣本入組要求沒有Bulk測序那樣嚴格，但是單細胞測序，特別是目的為圖譜研究時，需要通過提高樣本復雜度（增加樣本數），盡可能的構建某一疾病類型、群體細胞圖譜信息。因此，單細胞測序實驗設計時首先需要保證生物學重復，不同樣本來源的樣本建議單獨進行細胞解離和捕獲、建庫、測序，以保證捕獲到足夠的細胞數，單個樣本分別捕獲細胞時，后續分析除了整體分析以外，還可以做單樣本分析，保證分析的完備準確性。測序的革新讓科學研究從個體基因差異逐漸轉為個體細胞的基因差異。

單細胞測序是指針對單個細胞進行全轉錄組測序分析，可精確地描述每一個細胞的狀態，在異質性發育過程中具有特殊的應用價值。然而，單細胞測序無法給出固態異質化組織中細胞空間排布信息，對于揭示發育過程、病理微環境都存在很大的局限性。空間轉錄組測序以點陣形式記錄病理切片細胞的空間信息并進行測序，可以精確指示點陣內的全部基因表達情況。空間轉錄組測序的加入，無疑讓單細胞測序如虎添翼，更精確地勾勒了組織水平的異質性。烈冰斥巨資引進Novaseq6000，開啟更大通量測序新紀元。陜西10X Genomics單細胞測序數據分析

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一味的追求高細胞數量的捕獲，小心得不償失，原因在這：單細胞測序所有的分析都是基于細胞聚類進行，而細胞聚類是在區分cell和non-cell后，獲得細胞基因表達譜，通過降維（pca），無監督聚類以及可視化（t-SNE）得到的。進行細胞聚類時需要考慮到每個細胞的基因表達模式，因此即使是相同的數據，在剔除幾個細胞的情況下，前后獲得的聚類圖也會出現明顯不同。而當細胞捕獲數過多時，無論是假陰性和假陽性數據還是多細胞數據，都會對正常細胞聚類產生影響，造成聚類結果失真。這也是很多文章，特別是很多高分文章，為什么單個樣本捕獲細胞數在2000-3000的原因了。烈冰建議單個樣本捕獲細胞數在3000-5000個時，數據量在100G左右時，可以滿足分析和文章發表的多重需求。南通單細胞測序服務公司

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