針對樣本活性的問題，10×Genomics官方建議當(dāng)單細(xì)胞懸液活性低于70%時應(yīng)做去除死細(xì)胞操作，但也需要注意到，去除死細(xì)胞的操作會損失一定的細(xì)胞數(shù)量，10×Genomics和MiltenyiBiotec都沒有給出單細(xì)胞懸液含有多少細(xì)胞數(shù)量才建議做去除死細(xì)胞的操作。基于烈冰多年單細(xì)胞測序?qū)嶒灲?jīng)驗，建議當(dāng)細(xì)胞懸液進(jìn)行質(zhì)量和活性檢測后，考慮對細(xì)胞活性在50%-70%的懸液進(jìn)行去除死細(xì)胞的操作。而太低活性的懸液（小于30%），懸液中細(xì)胞大量死亡，可能已經(jīng)丟失了原組織內(nèi)的細(xì)胞比例和狀態(tài)，失真嚴(yán)重，建議重新收集樣本進(jìn)行新的實驗，保證數(shù)據(jù)的高質(zhì)量和實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。十二年測序經(jīng)驗，烈冰生物單細(xì)胞多組學(xué)領(lǐng)域的佼佼者。天津二代測序單細(xì)胞測序技術(shù)支持

關(guān)于10XGenomics單細(xì)胞平臺的樣本類型和樣本制備：10X平臺在上機前需要注意細(xì)胞消化后的細(xì)胞團(tuán)塊，獲得分離良好的細(xì)胞懸液、無細(xì)胞隨便、極少的細(xì)胞團(tuán)塊，且細(xì)胞活力高（＞70%）；此外，了解您所研究細(xì)胞的大小范圍也很重要。細(xì)胞大小通常與細(xì)胞表達(dá)的轉(zhuǎn)錄本數(shù)量有關(guān)。各種尺寸不同的細(xì)胞（一般直徑不大于50μm）均可與我們基因表達(dá)解決方案中使用的10XGenomics平臺兼容。一般來說，細(xì)胞制備方案將根據(jù)組織來源和細(xì)胞類型而變化。每種組織類型都是獨特的，因此，必須在開始任何單細(xì)胞實驗之前優(yōu)化樣本制備，烈冰多年樣本解離消化經(jīng)驗，累積10+物種、50+組織的消化protocol，若您的樣本為組織，且尚未成功將組織樣本消化成單細(xì)胞懸液，烈冰將盡可能提供技術(shù)及實驗上的幫助。成都二代測序單細(xì)胞測序數(shù)據(jù)分析測序的革新讓科學(xué)研究從個體基因差異逐漸轉(zhuǎn)為個體細(xì)胞的基因差異。

FluidigmC1平臺作為應(yīng)用于單細(xì)胞測序（SingleCellRNASequencing）領(lǐng)域的商業(yè)化分選技術(shù)，基于富魯達(dá)（Fluidigm®）的微流控技術(shù)，大約在幾個小時中可以捕獲96個左右的細(xì)胞，進(jìn)行各類的Single-Cell測序建庫。當(dāng)然，通量還是比較小。但不可否認(rèn)的是，現(xiàn)在很多非RNA類SingleCell測序，仍然在采用這樣的技術(shù)，如SingleCellDNA-Seq，SingleCellATAC-Seq等，都是采用此技術(shù)進(jìn)行單細(xì)胞分選后再分別用不同試劑盒建庫。所以可以說，至少在10X和BD，或者其他企業(yè)推出有效的SingleDNA測序技術(shù)之前，C1仍然會是市場上的重要組成部分。

針對單細(xì)胞測序的細(xì)胞數(shù)量判斷環(huán)節(jié)：主要是對細(xì)胞數(shù)量、基因表達(dá)量、測序質(zhì)量進(jìn)行整體描述。過濾標(biāo)準(zhǔn)：由于細(xì)胞破碎后游離RNA會釋放到環(huán)境或孔中，并且測序中也會存在一些死細(xì)胞，導(dǎo)致數(shù)據(jù)存在background值。因此，我們需要設(shè)定一定的標(biāo)準(zhǔn)來過濾掉假細(xì)胞或死細(xì)胞。以10×Genomics為例，細(xì)胞數(shù)量判斷主要通過分析UMICounts-Barcode曲線斜率拐點，當(dāng)存在多個斜率拐點的時候，結(jié)合預(yù)期UMI=500時的細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行過濾。當(dāng)斜率拐點低于UMI=500的時候，選擇UMI=500作為細(xì)胞的判斷的標(biāo)準(zhǔn)；否則，選擇和預(yù)期細(xì)胞數(shù)量接近的拐點作為細(xì)胞判斷的位置。這樣我們能夠有效獲得真實的并且在基因數(shù)量上可以分析的數(shù)據(jù)。烈冰單細(xì)胞測序，助力您的深入科學(xué)探究。

多樣本數(shù)據(jù)合并：FractionofReadsKept：合并樣本時，各樣本根據(jù)MappedBarcodedReadsperCell數(shù)量計算出來的數(shù)據(jù)利用率。如果各樣本間該參數(shù)值相差很大，需要進(jìn)行Downsample處理，以數(shù)據(jù)量少的樣本為基準(zhǔn)將不同樣本中細(xì)胞測序深度標(biāo)化到同一水平，從而避免因測序深度差異導(dǎo)致的基因檢測數(shù)量、基因表達(dá)水平的差異。烈冰科技自主研發(fā)的單細(xì)胞云平臺致力于幫助每一位客戶定制化分析數(shù)據(jù)，深度解讀數(shù)據(jù)分析結(jié)果，深入挖掘其背后的生物學(xué)意義；從操作便捷、結(jié)果可視化、分析可追溯、系統(tǒng)穩(wěn)定等方面助力單細(xì)胞研究，加速科研進(jìn)程！過去的十年，我們是知識的承載者；現(xiàn)在，我們在努力構(gòu)建醫(yī)學(xué)的大數(shù)據(jù)時代；未來我們將重新定義知識形態(tài)！長沙10X單細(xì)胞測序平臺

烈冰引進(jìn)國際主流單細(xì)胞和空間轉(zhuǎn)錄組測序平臺，保障細(xì)胞精度的前提下提供組織內(nèi)部精細(xì)區(qū)域的空間信息。天津二代測序單細(xì)胞測序技術(shù)支持

單細(xì)胞獲得困難，不同組織要求不盡相同難以搞定？烈冰2000+項目消化經(jīng)驗，100+組織類型解離protocol，精心設(shè)計不同組織實驗的解離、細(xì)胞懸浮實驗體系，確保單細(xì)胞的獲得。凍存樣本無法實驗，珍貴樣本無法使用？烈冰采用國際認(rèn)可的凍存組織復(fù)蘇技術(shù)以及死細(xì)胞過濾技術(shù)，確保凍存組織使用。珍貴樣本，細(xì)胞數(shù)量太少，消化背景雜無法做單細(xì)胞？采用國際認(rèn)可的10XGenomics，BDRhapsody雙平臺模式，根據(jù)樣本實際情況和用戶需求提供客觀有效的實驗方案,細(xì)胞量少，背景雜也能做單細(xì)胞。單細(xì)胞RNA分類精度不足，部分細(xì)胞無法細(xì)分？烈冰同時采用單細(xì)胞蛋白質(zhì)組與單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)，真正做到從上游到下游的全流程檢測，確保超高的細(xì)胞分類精度。天津二代測序單細(xì)胞測序技術(shù)支持

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