單細胞轉錄組測序是在單細胞水平上高通量測序分析基因表達譜的技術,突破傳統高通量測序的局限性,組織解離后,單個樣本一次上機能捕獲500-20000個細胞,基于每個細胞分別建庫測序,獲得單個細胞的基因結構和基因表達狀態,并鑒定細胞的類型,可以在不同樣本間從細胞類型的組成和豐度角度進行比較,反映細胞間的異質性。而2021年橫空出世的10XGenomicsChromiumX平臺實現了單塊chip上的百萬級別通量的細胞捕獲,系統實現16個通道同時運行,每個通道可捕獲2000-20000個細胞(不混樣),并支持原ChromiumController體統外的多種細胞捕獲百萬級別通量實驗,可準確鑒別稀有細胞類型和適配大規模單細胞研究。單細胞測序平臺,烈冰提供高性價比服務方案。南昌烈冰科技單細胞測序
相對于Smart-Seq技術在細胞數量上的問題,10X平臺普遍提供的細胞數量都在1000-20000不等的測序細胞量,這個量級的測序細胞量已經可以說能夠完全覆蓋絕大部分組織的SingleCell群體類型。因此,這兩種技術對于基于基因表達進行準確細胞分型上,無論是從細胞數量上來說還是表達檢測可靠性來說,都會更實用。同時依托RandomCellLabel技術,使得其對于NovaSeq、HiSeqXTen、Hiseq4000等設備存在的Indexhooping現象,相對于Smart-Seq數據來說,影響幾乎可以忽略不計(10XGenomics官方網站曾給出hooping測試結果,顯示無影響。西安10X Chromium X單細胞測序價格烈冰生物為您提供一站式全流程高通量測序服務。
針對樣本活性的問題,10×Genomics官方建議當單細胞懸液活性低于70%時應做去除死細胞操作,但也需要注意到,去除死細胞的操作會損失一定的細胞數量,10×Genomics和MiltenyiBiotec都沒有給出單細胞懸液含有多少細胞數量才建議做去除死細胞的操作。基于烈冰多年單細胞測序實驗經驗,建議當細胞懸液進行質量和活性檢測后,考慮對細胞活性在50%-70%的懸液進行去除死細胞的操作。而太低活性的懸液(小于30%),懸液中細胞大量死亡,可能已經丟失了原組織內的細胞比例和狀態,失真嚴重,建議重新收集樣本進行新的實驗,保證數據的高質量和實驗結果的準確性。
單細胞測序龐大的數據烈冰生信團隊傾情研發的NovelBrain®生信大數據分析平臺,可實現零代碼操作、簡單方便:單細胞瀏覽器的操作簡單,不需要命令行操作。簡單拖拽、設置參數即可運行,即使生信0基礎用戶也可以運用自如;可視化展示海量結果文件:可視化展示Cluster的基因數,UMI數量、線粒體RNA占比信息;以及不同Cluster對應的細胞數量、基因表達量、RNA表達量、樣本細胞分布、線粒體RNA表達量等;3D立體展示,文章動圖先人一步:單細胞瀏覽器針對t-SNE圖、UMAP圖和pseudotime結果進行三維立體展示,更加直觀立體的觀察細胞分布和聚類情況。烈冰全線實驗平臺滿足超深度、大規模發現和復雜疾病研究的測序。
RNA測序(RNA-seq)或芯片分析等大量樣本的轉錄組學方法作為一類強大的工具,可提供混合樣本的基因表達平均數據,幫助科學家開始揭示這種異質性。隨后,技術創新的飛躍在單細胞技術上達到新高度——使得科學家能夠定義細胞類型特異的基因表達,從過去的平均數據中分辨出真正驅動其表達模式的細胞異質性。這讓研究人員能夠更詳細地表征組織異質性,鑒定稀有細胞類型,并逐個細胞地仔細分析其分子機制。當獲得了對其研究的生物系統更為真實的圖譜后,研究人員就有了更為堅實可靠的知識基礎,并能在這個基礎上規劃下一步實驗,以獲取更深入的可行動見解。單細胞多組學測序可識別重要的轉錄因子,進行譜系和發育追蹤。武漢高通量測序單細胞測序技術支持
截至2021年10月,烈冰助力發表單細胞測序文章近20篇。南昌烈冰科技單細胞測序
單細胞RNA-seq、RNA-seq和逆轉錄qPCR(RT-qPCR)都采用一個共同過程,即分離RNA并將其轉化為cDNA進行分析。不過,每種分析在開展方式和獲得的數據上有所不同。RNA-seq和RT-qPCR都是先從大量細胞中分離RNA,然后將其轉化為cDNA。RNA-seq是使用cDNA來構建新一代測序文庫,從而測定整個轉錄組的基因表達。RT-qPCR則是從cDNA中擴增特定靶點,并通過熒光測定表達水平。RT-qPCR限于已知靶點,而RNA-seq可實現無偏倚的全轉錄組基因表達分析。然而,這兩者只能提供細胞群體內基因表達的平均情況。單細胞RNA-seq則在分離RNA之前將單細胞分離到微孔或單個微反應容器中。然后用細胞特異性的條形碼標記RNA,確保來自每個細胞的cDNA可以追溯到起源細胞。與RNA-seq相似,帶有條形碼的cDNA也被用于構建新一代測序文庫,從而能夠對每個細胞的整個轉錄組進行基因表達測定。南昌烈冰科技單細胞測序
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