多樣本數據合并:FractionofReadsKept:合并樣本時,各樣本根據MappedBarcodedReadsperCell數量計算出來的數據利用率。如果各樣本間該參數值相差很大,需要進行Downsample處理,以數據量少的樣本為基準將不同樣本中細胞測序深度標化到同一水平,從而避免因測序深度差異導致的基因檢測數量、基因表達水平的差異。烈冰科技自主研發的單細胞云平臺致力于幫助每一位客戶定制化分析數據,深度解讀數據分析結果,深入挖掘其背后的生物學意義;從操作便捷、結果可視化、分析可追溯、系統穩定等方面助力單細胞研究,加速科研進程!十二年測序經驗,烈冰生物單細胞多組學領域的佼佼者。吉林10X Genomics單細胞測序平臺
細胞計數和活力評估在評估樣本質量時,需要在細胞清洗和過濾之后測定細胞活力,這一點至關重要。測定細胞活力有許多種方法,烈冰多年單細胞測序經驗發現臺盼藍法在鑒定活細胞與死細胞的比例時效果很好。細胞計數的準確性以及目標回收量和實際回收量之間的一致性,取決于我們了解樣本中有多少個細胞。一旦過濾和清洗完成,可采用細胞計數設備(如血球計數器或自動細胞計數儀)進行定量。這些設備不但能提供準確的細胞計數,還能計算出向微流體芯片上樣適量細胞所需的細胞懸液體積。重慶10X Chromium X單細胞測序數據分析可視化全線搭建10x Genomics單細胞測序平臺。
單細胞轉錄組測序是在單細胞水平上高通量測序分析基因表達譜的技術,突破傳統高通量測序的局限性,組織解離后,單個樣本一次上機能捕獲500-20000個細胞,基于每個細胞分別建庫測序,獲得單個細胞的基因結構和基因表達狀態,并鑒定細胞的類型,可以在不同樣本間從細胞類型的組成和豐度角度進行比較,反映細胞間的異質性。而2021年橫空出世的10XGenomicsChromiumX平臺實現了單塊chip上的百萬級別通量的細胞捕獲,系統實現16個通道同時運行,每個通道可捕獲2000-20000個細胞(不混樣),并支持原ChromiumController體統外的多種細胞捕獲百萬級別通量實驗,可準確鑒別稀有細胞類型和適配大規模單細胞研究。
關于單細胞測序實驗樣本制備,這與流式細胞術用戶熟悉的步驟完全一致,也就是通過酶促或機械消化、細胞分選或其他細胞分離技術從整個樣本中制備生成活的單細胞懸液。隨后是細胞計數和質量控制步驟,以確保您的樣本有適當濃度的活細胞,并且不含細胞團塊和死細胞碎片。如有必要,您還可以使用抗體對樣本進行染色,標記細胞表面蛋白或其他生物分析物,或者通過FACS來富集感興趣的細胞類型。解離樣本時采取的具體步驟將根據您的起始材料和實驗目標而定。也許需要額外的制備步驟,具體取決于組織質量、樣本豐度、細胞大小,以及是否需要提取出細胞核進行染色質可接近性分析。無論具體的考慮因素如何,所有樣本類型都遵循同一個基本原則,那就是生成高質量的單細胞懸液。全線搭建10X Genomics Chromium Controller單細胞測序平臺。
烈冰科技作為國內率先同時擁有10XGenomics和BDRhapsody雙分選平臺的測序服務商及云計算服務供應商,經過多年實戰,擁有豐富的單細胞懸液制備和分選經驗,實測BDRhapsody對能夠高效捕獲粒細胞。針對不同的分選平臺、建庫方法,實戰總結搭建出不同的數據預處理工作流程;烈冰科技NovelBrain®生物大數據平臺能有效支撐生命科學研究、醫療健康等領域對大數據分析的需求。高通量測序實驗平臺,包括NovaSeq6000、10XChromiumX、BDFACSMelody、PANNORAMIC數字切片掃描儀等,配合一支來自海內外名校、多學科交叉型的高素質綜合團隊,為您的科學研究保駕護航。高通量測序技術是對傳統測序一次突破性的改變,一次對幾十萬到幾百萬條核酸序列進行測定。成都10X單細胞測序商業化服務
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10XGenomics和Drop-Seq具有類似的技術原理。從橫向孔道中逐一輸入凝膠微珠,一列縱向孔道輸入細胞,凝膠微珠與細胞碰撞后會吸附在凝膠微珠上,并通過微流控技術,將之輸入到第二縱向孔道,即油相孔道中。這時候,就形成了一個個油滴并輸出并收集在EP管中。每一個油滴中會落入一個細胞以及一個凝膠微珠,那么在每一個凝膠微珠中上長滿了不同的CellBarcode和UMIBarcode連接形成的序列,再加上一端PolyT的抓手,構成我們的捕獲凝膠微珠。而這個凝膠微珠抓手就會使用oligodT抓住mRNA構建文庫。吉林10X Genomics單細胞測序平臺
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