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陜西二代測序單細胞測序數據分析

來源: 發布時間:2022-08-11

基于10XGeomics動態微流控技術,利用Tn5轉座酶酶切開放染色質,形成短片段,單細胞ATAC測序在表觀基因組學水平上,揭示單細胞染色質的可及性問題,區分細胞異質性,獲得開放染色質的位置、轉錄因子的結合位點、核小體的調控區域和染色質狀態等信息,是單細胞表觀遺傳學的重要突破:分析每個細胞數千個獨特的染色質開放區域,識別細胞類型和細胞狀態;識別重要的轉錄因子,進行譜系和發育追蹤;探究驅動細胞類型和狀態之間基因表達差異的非編碼序列;探究細胞類型特異性和基因調控網絡特征等。是當前重要的多組學研究基因表達和表觀遺傳學的手段。單細胞測序技術提供了單個細胞水平下的科學研究視角。陜西二代測序單細胞測序數據分析

機體為響應各種應激,其細胞會從一種功能“狀態”轉變為另一種功能“狀態”;當細胞在不同狀態之間轉變時,往往會經歷轉錄重組,導致一些基因被沉默,一些基因被重新“喚醒”,但純化這些瞬態細胞進行研究是很困難或不可能的;scRNA-seq擬時序分析可以讓我們在不需要純化的情況下查看這些細胞狀態。擬時序分析,即根據不同細胞亞群基因表達量隨時間的變化情況,構建細胞譜系發育,但這里的時間并不是真時間,而是一個虛擬的時間,是指的細胞與細胞之間的轉化和演替的順序和軌跡。即使在同一個樣本中,也會存在多種不同的細胞形態。因此,不論測定了多少樣本,我們都可以采用擬時序分析對樣本中的細胞轉化和變化進行描述。北京10X Chromium X單細胞測序商業化服務深度的單細胞測序數據解讀助力醫療健康大時代。

現有的單細胞測序技術陣營在幾個主要領域存在差別。一個是分隔單個細胞以在其中進行微反應的物理平臺。在這個空間,單個細胞的內容物釋放,轉錄本或其他生物分析物被標記或添加索引,以便下游識別。現有技術的另一個主要區別是如何添加索引,就像生成測序文庫所涉及的流程步驟一樣。10XGenomics單細胞測序平臺采用動態微流控技(Drop-Seq具有類似的技術原理)。從橫向孔道中逐一輸入凝膠微珠,其中一列縱向孔道輸入細胞,凝膠微珠與細胞碰撞后會吸附在凝膠微珠上,并通過微流控技術,將之輸入到第二縱向孔道,即油相孔道中。這時候,就形成了一個個油滴并輸出并收集在EP管中。每一個油滴中會落入一個細胞以及一個凝膠微珠,那么在每一個凝膠微珠中上長滿了不同的CellBarcode和UMIBarcode連接形成的序列,再加上一端PolyT的抓手,構成我們的捕獲凝膠微珠。而這個凝膠微珠抓手就會使用oligodT抓住mRNA構建文庫。

基于10XNextGEM技術,單細胞測序一次實驗可以同時檢測近萬個細胞,可在一個樣本中同時獲3端mRNA表達譜、如需和免疫組庫(TCR和BCR)的數據進行聯合時,即某些研究還需結合基因的表達譜和V(D)J數據進行復雜組織樣本的是影響免疫應答分析,監測免疫療法的效果,研究疾病發生、發展的分子機制,可進行單細胞免疫組庫測序:烈冰單細胞免疫組庫平臺具備:1000+項目經驗,一次實驗可同時獲取1000-20000個細胞的文庫構建,獲得轉錄組和免疫組數據;具備完善的免疫組庫測序和實驗質控流程,獲取V(D)J全長序列的配對信息;豐富的免疫組庫測序和數據分析經驗,實現專屬個性化數據分析服務,搭配單細胞分析云平臺,一鍵導出交互性的動態結果報告。搭建多種測序數據的生物信息分析平臺,5000+項目檢驗,真實可信賴。

細胞計數和活力評估在評估樣本質量時,需要在細胞清洗和過濾之后測定細胞活力,這一點至關重要。測定細胞活力有許多種方法,烈冰多年單細胞測序經驗發現臺盼藍法在鑒定活細胞與死細胞的比例時效果很好。細胞計數的準確性以及目標回收量和實際回收量之間的一致性,取決于我們了解樣本中有多少個細胞。一旦過濾和清洗完成,可采用細胞計數設備(如血球計數器或自動細胞計數儀)進行定量。這些設備不但能提供準確的細胞計數,還能計算出向微流體芯片上樣適量細胞所需的細胞懸液體積。單細胞多組學測序可識別重要的轉錄因子,進行譜系和發育追蹤。北京10X單細胞測序數據分析可視化

單細胞測序是高通量測序下的又一重大技術突破。陜西二代測序單細胞測序數據分析

10×Genomics單細胞方案要求使用具有較高活性的單細胞懸液。在實際實驗中,我們發現因為樣本類型和制備單細胞懸液方法的不同,容易出現單細胞懸液中死亡細胞的比例較高的情況。去除單細胞懸液中的死細胞和其他污染物對獲得高質量數據是至關重要的。這是因為,死亡的細胞易裂解導致其中的RNA釋放出來。這種cell-freeRNA會導致檢測的背景噪聲,并會影響單細胞數據的質量。因此當樣本活性較差時,對細胞懸液中細胞活性檢測后,需要進行一般死細胞去除的工作(一般懸液活性小于70%時考慮此操作),以保證較高的上機捕獲細胞的質量。陜西二代測序單細胞測序數據分析

上海烈冰生物醫藥科技有限公司致力于醫藥健康,以科技創新實現高質量管理的追求。烈冰生物作為醫藥健康的企業之一,為客戶提供良好的單細胞測序,生物大數據云分析平臺,空間轉錄組測序,單細胞多組學測序。烈冰生物始終以本分踏實的精神和必勝的信念,影響并帶動團隊取得成功。烈冰生物始終關注醫藥健康市場,以敏銳的市場洞察力,實現與客戶的成長共贏。

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