單細胞測序是指針對單個細胞進行全轉錄組測序分析，可精確地描述每一個細胞的狀態，在異質性發育過程中具有特殊的應用價值。然而，單細胞測序無法給出固態異質化組織中細胞空間排布信息，對于揭示發育過程、病理微環境都存在很大的局限性。空間轉錄組測序以點陣形式記錄病理切片細胞的空間信息并進行測序，可以精確指示點陣內的全部基因表達情況。空間轉錄組測序的加入，無疑讓單細胞測序如虎添翼，更精確地勾勒了組織水平的異質性。高通量測序技術是對傳統測序一次顛覆性的改變，一次對幾十萬到幾百萬條核酸序列進行測定。吉林10X Chromium X單細胞測序服務

單細胞RNA-seq、RNA-seq和逆轉錄qPCR（RT-qPCR）都采用一個共同過程，即分離RNA并將其轉化為cDNA進行分析。不過，每種分析在開展方式和獲得的數據上有所不同。RNA-seq和RT-qPCR都是先從大量細胞中分離RNA，然后將其轉化為cDNA。RNA-seq是使用cDNA來構建新一代測序文庫，從而測定整個轉錄組的基因表達。RT-qPCR則是從cDNA中擴增特定靶點，并通過熒光測定表達水平。RT-qPCR限于已知靶點，而RNA-seq可實現無偏倚的全轉錄組基因表達分析。然而，這兩者只能提供細胞群體內基因表達的平均情況。單細胞RNA-seq則在分離RNA之前將單細胞分離到微孔或單個微反應容器中。然后用細胞特異性的條形碼標記RNA，確保來自每個細胞的cDNA可以追溯到起源細胞。與RNA-seq相似，帶有條形碼的cDNA也被用于構建新一代測序文庫，從而能夠對每個細胞的整個轉錄組進行基因表達測定。沈陽單細胞測序百萬通量平臺過去的十年，我們是知識的承載者；現在，我們在努力構建醫學的大數據時代；未來我們將重新定義知識形態！

基于10XGeomics動態微流控技術，利用Tn5轉座酶酶切開放染色質，形成短片段，單細胞ATAC測序在表觀基因組學水平上，揭示單細胞染色質的可及性問題，區分細胞異質性，獲得開放染色質的位置、轉錄因子的結合位點、核小體的調控區域和染色質狀態等信息，是單細胞表觀遺傳學的重要突破：分析每個細胞數千個獨特的染色質開放區域，識別細胞類型和細胞狀態；識別重要的轉錄因子，進行譜系和發育追蹤；探究驅動細胞類型和狀態之間基因表達差異的非編碼序列；探究細胞類型特異性和基因調控網絡特征等。是當前重要的多組學研究基因表達和表觀遺傳學的手段。

10XGenomics是一種基于drop的微流控技術，液體在配套芯片中的微管道中流動，因此細胞直徑會受到芯片中微管道直徑的限制，微流體通道的直徑約為50~60um，因此捕獲細胞的直徑不能超過40um。當細胞直徑過大時，容易出現管道堵塞，造成GEM生成失敗，對于神經科學研究和心血管疾病研究的老師而言，準備采用單細胞技術用于課題研究的時候，往往會遇到一個尷尬的問題，就是目標細胞，例如神經元細胞、成熟心肌細胞由于體積過大，不適用于10X單細胞技術。其中神經元細胞的直徑很大，直接超過了芯片中管道的直徑，雖然心肌細胞直徑低于50um，但是成熟心肌細胞的長度很長，有可能堵塞通道造成實驗失敗，這也是為什么現在很多已發表的心臟單細胞文章，主要研究方向是心臟發育的原因了，主要還是因為未發育成熟的心肌細胞比較小，不會出現堵塞管道的風險。因此可以考慮組織解離后過40um濾網，過濾掉大細胞，避免出現管道堵塞、實驗失敗的風險。此種方案的缺點是大細胞被過濾掉，丟失相關細胞數據；另外組織解離獲得高質量細胞懸液以后，繼續做細胞裂解抽細胞核，開展細胞核測序。具體可訪問烈冰官網給我們留言，烈小冰將安排專業技術為您詳細解答。單細胞測序技術的迅速發展和應用推廣，為從多維度揭示疾病發展提供了強有力的工具。

科技的發展讓單細胞測序已經應用于疾病發展過程中的關鍵過程和事件，如前病變向惡性的轉化、惡性向轉移性的發展，以及對多種用藥的反應。單細胞測序技術作為一個需要將組織解離成為單細胞懸液，或者是采用細胞核捕獲的策略捕獲單細胞核，進而對于每一個單細胞或者細胞核進行測序得到結果的技術，其空間定位信息是丟失的。這就衍生出了一個問題就是如果單細胞A與B并不出現在一個組織區域中他們會互相影響或者轉化么？免疫研究中，兩個具有非常強的PDL1-PD1的配對關系的細胞在組織切片上風馬牛不相及，這樣PDL1-PD1的關系會生效么？單細胞測序因其強大的探究疾病--細胞--基因的關系，一度成為高通量測序技術的“天花板”。吉林10X單細胞測序技術支持

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單細胞獲得困難，不同組織要求不盡相同難以搞定？烈冰2000+項目消化經驗，100+組織類型解離protocol，精心設計不同組織實驗的解離、細胞懸浮實驗體系，確保單細胞的獲得。凍存樣本無法實驗，珍貴樣本無法使用？烈冰采用國際認可的凍存組織復蘇技術以及死細胞過濾技術，確保凍存組織使用。珍貴樣本，細胞數量太少，消化背景雜無法做單細胞？采用國際認可的10XGenomics，BDRhapsody雙平臺模式，根據樣本實際情況和用戶需求提供客觀有效的實驗方案,細胞量少，背景雜也能做單細胞。單細胞RNA分類精度不足，部分細胞無法細分？烈冰同時采用單細胞蛋白質組與單細胞轉錄組測序技術，真正做到從上游到下游的全流程檢測，確保超高的細胞分類精度。吉林10X Chromium X單細胞測序服務

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