當組織冷凍切片附在帶有spatialbarcode的空間轉(zhuǎn)錄組芯片上時，通過透化處理，細胞內(nèi)的mRNA釋放出來，從而被芯片上帶有oligo-dT的探針捕獲。被捕獲的mRNA開始逆轉(zhuǎn)錄，得到的cDNA中包含了spatialbarcode序列。通過上機測序，可以將每個mRNA轉(zhuǎn)錄的序列映射回組織切片中的映射回組織切片中的原始位置。Visium空間轉(zhuǎn)錄組的重點在于芯片部分：正式文庫構(gòu)建的芯片上有4個捕獲區(qū)域（6.5mmX6.5mm，可以檢測4個樣本）每個捕獲區(qū)域含有約5000個被條形碼標記的點（barcodedspots）每個spot直徑55μm，每個spot能捕獲1-10個細胞spot與spot中心點之間的距離為100μm每個spot含有上百萬個可以與mRNA結(jié)合的捕獲探針，每個探針上都帶有獨特的spatialbarcodes，用以標記捕獲的mRNA的空間位置。經(jīng)驗豐富的實驗團隊，為獲得示組織內(nèi)真實表達水平的高質(zhì)量冷凍切片提供硬件和技術(shù)保障。寧波高通量測序空間轉(zhuǎn)錄組測序服務(wù)公司

烈冰生物生信分析團隊緊追國際前沿、整合添加多項國際期刊認可的空轉(zhuǎn)分析工具，構(gòu)建一套完整的數(shù)據(jù)分析流程；精心研發(fā)空轉(zhuǎn)結(jié)果瀏覽器，可同步展示空間轉(zhuǎn)錄組與單細胞測序分析結(jié)果，詳細深入地解析空間轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)。完成從Rawdata（原始數(shù)據(jù)）到Spot-Gene的具有定位信息的表達矩陣的過程后，就進入了空轉(zhuǎn)的第二步，去進行Spot的Cluster的過程，熟悉單細胞測序的研究者知道，Cluster在單細胞測序中往往表示為細胞的類型，也就是說能聚在一起采用算法分為一個群體細胞是一個Celltype（當然分情況也會有不同）。而在空轉(zhuǎn)中，也正是由于前面提到了細胞的非單一性，導(dǎo)致了這里的分群并不是單純的同一細胞類型，而應(yīng)該認為是具有相同細胞組成的點陣區(qū)域，或者說是近似的組織結(jié)構(gòu)區(qū)域。寧波烈冰生物空間轉(zhuǎn)錄組服務(wù)機構(gòu)空間轉(zhuǎn)錄組測序因其強大的探究疾病--細胞--基因的關(guān)系，一度成為高通量測序技術(shù)的“天花板”。

空間轉(zhuǎn)錄組測序的數(shù)據(jù)分析基本分為三個階段：1.數(shù)據(jù)的預(yù)處理部分；2.Spot點陣的分群與定義；3.Spot分群的功能與生物學(xué)價值。每一個部分都不可或缺，其結(jié)果都對后續(xù)的分析結(jié)果有重要影響。由于空間轉(zhuǎn)錄組的序列結(jié)構(gòu)與單細胞轉(zhuǎn)錄組測序的左端序列結(jié)構(gòu)是非常接近的，都是Cellbarcode/SpotBarcode+UMI+捕獲區(qū)域這樣的設(shè)計。右端普遍為捕獲的RNA序列。因此采用單細胞的原始數(shù)據(jù)過濾策略即可，左端可以考慮切下捕獲區(qū)域前的序列區(qū)域作為后續(xù)分析用的序列以減少分析負荷。隨后，采用10X官方的Spatialranger的策略進行后續(xù)分析，解析出位于空間位置中的有效的Spot表達矩陣。

空間轉(zhuǎn)錄組測序是在組織原位檢測全轉(zhuǎn)錄組基因表達的?種技術(shù)，可以展?組織切?中不同區(qū)域的基因表達情況，同時能夠得到?的基因在組織內(nèi)部的空間位置信息。與傳統(tǒng)的全基因轉(zhuǎn)錄組或單細胞轉(zhuǎn)錄組測序相?，空間轉(zhuǎn)錄組測序漿病理影像（H&E染?）與測序數(shù)據(jù)映射在?起，進?可以分析組織切內(nèi)部空間結(jié)構(gòu)的細胞異質(zhì)性。常規(guī)單細胞轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)丟失了細胞在原組織中至關(guān)重要的空間位置信息，而單細胞空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)在進行單細胞轉(zhuǎn)錄組測序的同時保留并記錄了細胞的空間位置信息。空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)能夠揭示細胞間的相互作用以及細胞所處的微環(huán)境，將成為發(fā)育生物學(xué)、神經(jīng)生物學(xué)、免疫生物學(xué)等領(lǐng)域的研究利器。烈冰全線實驗平臺滿足超深度、大規(guī)模發(fā)現(xiàn)和復(fù)雜疾病研究的測序。

空間轉(zhuǎn)錄組測序的關(guān)鍵就在于，解決了空間位置保留的問題。被放置在芯片區(qū)域內(nèi)的冰凍組織切片在經(jīng)過H&E染色和成像記錄后，會被進行透化處理，釋放細胞中的RNA。芯片上的捕獲引物的中段設(shè)置了帶有獨特標識的條形碼區(qū)域。芯片被劃分為了數(shù)個不同的捕獲區(qū)域，每個捕獲區(qū)域中錨定的引物都帶有不同的條形碼序列。每個區(qū)域?qū)?yīng)的組織位置會被記錄下來，然后再進行測序后，通過條形碼將不同區(qū)域的測序結(jié)果，映射到對應(yīng)的組織位置上，拼貼形成組織樣品的空間轉(zhuǎn)錄組圖像。烈冰測序數(shù)據(jù)分析平臺，不依賴已有物種信息，可研究非模式物種，針對不同平臺的數(shù)據(jù)，制定多套流程；重慶烈冰科技空間轉(zhuǎn)錄組測序價格

烈冰空間轉(zhuǎn)錄組，多平臺任意選擇，隨心組合，優(yōu)化您的科學(xué)研究，助力探索新的科學(xué)視角。寧波高通量測序空間轉(zhuǎn)錄組測序服務(wù)公司

在轉(zhuǎn)錄組學(xué)領(lǐng)域，空間轉(zhuǎn)錄組也開辟了新世界。Nature Methods在今年1月份將空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)評價為2020年度方法，空間轉(zhuǎn)錄組方法近幾年越來越受到歡迎，它將帶領(lǐng)組學(xué)在生物學(xué)的研究上進入新的階段。從轉(zhuǎn)錄組測序到實現(xiàn)單細胞轉(zhuǎn)錄測序，這一過程為精確認識不同細胞類型提供了巨大的幫助。現(xiàn)在，新的空間轉(zhuǎn)錄組方法不僅帶來轉(zhuǎn)錄組信息，同時還提供空間信息，幫研究者更好辨別轉(zhuǎn)錄的位置，進一步擴展到單細胞分辨率，這會更大程度提升科學(xué)家對單個細胞的認識和解讀。寧波高通量測序空間轉(zhuǎn)錄組測序服務(wù)公司

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