空間轉錄組測序的數據質量和玻片有效區(qū)域的利用率、貼片的質量和透化時間息息相關。貼片質量不良會影響總的有效spot數等；而透化不合理會導致spot的reads數、基因中位數等參數。而在特異性基因表達方面，我們也可以統計空間轉錄組群體的特異性基因表達即Markergene，將他們在組織切片以及空轉上進行著色。我們也可以對于任意一個已知的基因或者數據庫中的一些細胞Marker，然后將其在基因表達在空間轉錄組的切片以及HE染色上展示自己的基因表達進而了解，群體中的可能的細胞組成關系。烈冰科技已建立了基于空間轉錄組的高通量測序實驗多平臺。寧波烈冰科技空間轉錄組平臺

基于橋式PCR技術的簇生成可以將模版鏈迅速擴增成千上萬倍，保證過程中足夠的測序深度。測序時使用特殊標記的dNTP：1）堿基上通過敏感鍵修飾上不同的熒光基團，用于區(qū)分ATCG；2）3端使用疊氮基團封閉，保證一次循環(huán)只上一個dNTP。每一輪循環(huán)結束時，會通過高速熒光顯微鏡記錄熒光圖像，再通入試劑除去熒光基團和疊氮基團，開啟下一循環(huán)。通過分析讀取同一位點的熒光，實時獲取模版鏈的堿基序列。由于過程中使用的化學反應并不可控，隨著循環(huán)數的增大會出現不同步的情況，因此Illumina的讀長只能限制在200bp左右。杭州高通量測序空間轉錄組數據分析可視化搭建多種測序數據的生物信息分析平臺，5000+項目檢驗，真實可信賴。

空間轉錄組技術流程：1、組織優(yōu)化由于不同物種、組織來源的樣本所需的比較好透化時間不盡相同，在正式開展空間轉錄組測序實驗前，需要利用組織優(yōu)化kit進行條件的摸索。組織優(yōu)化芯片上包含8個捕獲區(qū)域，每個區(qū)域均覆蓋了熒光標記探針，可捕獲mRNA形成帶有熒光標簽的cDNA，隨即可通過熒光成像結果判定比較好透化時間及組織優(yōu)化條件。2、空間轉錄組測序確定組織優(yōu)化條件后，即可進行切片、H&E染色及成像、空間轉錄組文庫構建及測序分析流程。

當組織冷凍切片附在帶有spatialbarcode的空間轉錄組芯片上時，通過透化處理，細胞內的mRNA釋放出來，從而被芯片上帶有oligo-dT的探針捕獲。被捕獲的mRNA開始逆轉錄，得到的cDNA中包含了spatialbarcode序列。通過上機測序，可以將每個mRNA轉錄的序列映射回組織切片中的映射回組織切片中的原始位置。Visium空間轉錄組的重點在于芯片部分：正式文庫構建的芯片上有4個捕獲區(qū)域（6.5mmX6.5mm，可以檢測4個樣本）每個捕獲區(qū)域含有約5000個被條形碼標記的點（barcodedspots）每個spot直徑55μm，每個spot能捕獲1-10個細胞spot與spot中心點之間的距離為100μm每個spot含有上百萬個可以與mRNA結合的捕獲探針，每個探針上都帶有獨特的spatialbarcodes，用以標記捕獲的mRNA的空間位置。烈冰科技成立10余年，為科研學者提供專注的測序數據分析服務。

10xGenomics空間轉錄組用于文庫構建的每張載玻片上有四個捕獲區(qū)域，每個捕獲區(qū)域的大小為6.5x6.5mm，包含5000個被條形碼標記的點（barcodedspots），每個點的直徑為55μm，點和點之間中心的距離為100μm，并且每個點都有一個barcode序列。組織切片的細胞中會釋放出mRNA，遷移到每個spot的mRNA會被標記上相應的barcode序列，然后進行文庫構建并進行測序。根據數據的條形碼信息對數據進行分析，以確定哪些數據來自哪個位置，從而實現空間基因表達的可視化。空間轉錄組測序技術遍地開花，烈冰服務讓您的生物醫(yī)學研究如虎添翼。廣州烈冰科技空間轉錄組數據分析

烈冰測序數據分析平臺，不依賴已有物種信息，可研究非模式物種，針對不同平臺的數據，制定多套流程；寧波烈冰科技空間轉錄組平臺

空間轉錄組數據可以用單細胞轉錄組數據的分析策略進行分析，例如，利用GO和Pathway分析篩選不同發(fā)育時期特定空間區(qū)域內的信號通路及其關鍵基因的較大情況，揭示在特定發(fā)育時期特定區(qū)域內發(fā)生的生物學過程。針對任何一個基因，空間轉錄組可以顯示表達該基因的點陣及其空間排布；單細胞轉錄組可以給出該基因表達的細胞類群；原位測序可以給出該基因在細胞內的表達狀況。通過不同發(fā)育時間點的信息比較，可以分析細胞類群在某個部位在不同時間點的差異，給出其在細胞內的真實的演變狀況。寧波烈冰科技空間轉錄組平臺

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