冰凍切片的空間轉錄組測序在RNA捕獲、文庫構建方面，需要將組織切片貼合在帶有mRNA結合捕獲探針的載玻片上，通過甲醛固定、H&E染色得到組織切片的形態結構。再進行透化處理，使細胞中的mRNA釋放，并結合到芯片相鄰的捕獲探針上。將捕獲的mRNA反轉錄合成cDNA并構建測序文庫進行上機測序，從而獲取基因表達信息。總體來說，空間轉錄組的實驗流程包括：組織凍存-OCT包埋-冷凍切片-固定染色-組織透化-cDNA合成及建庫-上機測序，而需要客戶進行樣本準備的步驟相對簡單：組織凍存與OCT包埋。目前已應用的單細胞多組學聯合分析包括轉錄組和基因組，轉錄組和ＤＮＡ甲基化、轉錄組和蛋白組。上海scRNA單細胞多組學多組學測序

多樣本數據合并：FractionofReadsKept：合并樣本時，各樣本根據MappedBarcodedReadsperCell數量計算出來的數據利用率。如果各樣本間該參數值相差很大，需要進行Downsample處理，以數據量少的樣本為基準將不同樣本中細胞測序深度標化到同一水平，從而避免因測序深度差異導致的基因檢測數量、基因表達水平的差異。烈冰科技自主研發的單細胞云平臺致力于幫助每一位客戶定制化分析數據，深入解讀數據分析結果，深入挖掘其背后的生物學意義；從操作便捷、結果可視化、分析可追溯、系統穩定等方面助力單細胞研究，加速科研進程！成都scRNA單細胞多組學技術支持分子檢測型單細胞多組學測序技術大多數以轉錄 組測序為重點。

基于橋式PCR技術的簇生成可以將模版鏈迅速擴增成千上萬倍，保證過程中足夠的測序深度。測序時使用特殊標記的dNTP：1）堿基上通過敏感鍵修飾上不同的熒光基團，用于區分ATCG；2）3端使用疊氮基團封閉，保證一次循環只上一個dNTP。每一輪循環結束時，會通過高速熒光顯微鏡記錄熒光圖像，再通入試劑除去熒光基團和疊氮基團，開啟下一循環。通過分析讀取同一位點的熒光，實時獲取模版鏈的堿基序列。由于過程中使用的化學反應并不可控，隨著循環數的增大會出現不同步的情況，因此Illumina的讀長只能限制在200bp左右。

機體為響應各種應激，其細胞會從一種功能“狀態”轉變為另一種功能“狀態”；當細胞在不同狀態之間轉變時，往往會經歷轉錄重組，導致一些基因被“沉默”，一些基因被重新“喚醒”，但純化這些瞬態細胞進行研究是很困難或不可能的；scRNA-seq擬時序分析可以讓我們在不需要純化的情況下查看這些細胞狀態。擬時序分析，即根據不同細胞亞群基因表達量隨時間的變化情況，構建細胞譜系發育，但這里的時間并不是真時間，而是一個虛擬的時間，是指的細胞與細胞之間的轉化和演替的順序和軌跡。即使在同一個樣本中，也會存在多種不同的細胞形態。因此，不論測定了多少樣本，我們都可以采用擬時序分析對樣本中的細胞轉化和變化進行描述。分子檢測型單細胞多組學測序技術中也有一些集 中于探究單細胞內表觀遺傳組各層面的變化及關聯。

FluidigmC1平臺基于富魯達（Fluidigm®）的微流控技術應用于單細胞測序（SingleCellRNASequencing）領域的商業化中，該技術大約在幾個小時中可以捕獲96個左右的細胞，進行各類的Single-Cell測序建庫。當然，通量還是比較小。但不可否認的是，現在很多非RNA類SingleCell測序，仍然在采用這樣的技術，如SingleCellDNA-Seq，SingleCellATAC-Seq等，都是采用此技術進行單細胞分選后再分別用不同試劑盒建庫。所以可以說，至少在10XGenomics、BD或者其他企業推出有效的SingleDNA測序技術之前，C1仍然會是市場上的重要組成部分。烈冰測序數據分析平臺，不依賴已有物種信息，可研究非模式物種，針對不同平臺的數據，制定多套流程。上海烈冰生物單細胞多組學商業化服務

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單細胞測序是指針對單個細胞進行全轉錄組測序分析，可精確地描述每一個細胞的狀態，在異質性發育過程中具有不可忽視的應用價值。然而，單細胞測序無法給出固態異質化組織中細胞空間排布信息，對于揭示發育過程、病理微環境都存在很大的局限性。空間轉錄組測序以點陣形式記錄病理切片細胞的空間信息并進行測序，可以精確指示點陣內的全部基因表達情況。空間轉錄組測序的加入，無疑讓單細胞測序如虎添翼，更精確地勾勒了組織水平的異質性。上海scRNA單細胞多組學多組學測序

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