基于橋式PCR技術的簇生成可以將模版鏈迅速擴增成千上萬倍，保證過程中足夠的測序深度。測序時使用特殊標記的dNTP：1）堿基上通過敏感鍵修飾上不同的熒光基團，用于區分ATCG；2）3端使用疊氮基團封閉，保證一次循環只上一個dNTP。每一輪循環結束時，會通過高速熒光顯微鏡記錄熒光圖像，再通入試劑除去熒光基團和疊氮基團，開啟下一循環。通過分析讀取同一位點的熒光，實時獲取模版鏈的堿基序列。由于過程中使用的化學反應并不可控，隨著循環數的增大會出現不同步的情況，因此Illumina的讀長只能限制在200bp左右。空間轉錄組測序，上海烈冰生物科技很靠譜。武漢上海烈冰生物空間轉錄組測序服務

10xGenomics空間轉錄組用于文庫構建的每張載玻片上有四個捕獲區域，每個捕獲區域的大小為6.5x6.5mm，包含5000個被條形碼標記的點（barcodedspots），每個點的直徑為55μm，點和點之間中心的距離為100μm，并且每個點都有一個barcode序列。組織切片的細胞中會釋放出mRNA，遷移到每個spot的mRNA會被標記上相應的barcode序列，然后進行文庫構建并進行測序。根據數據的條形碼信息對數據進行分析，以確定哪些數據來自哪個位置，從而實現空間基因表達的可視化。西安空間轉錄組數據分析可視化烈冰引進國際主流空間轉錄組測序平臺，提供保留組織內部精細區域的空間信息的轉錄組測序。

空間轉錄組技術流程：1、組織優化由于不同物種、組織來源的樣本所需的比較好透化時間不盡相同，在正式開展空間轉錄組測序實驗前，需要利用組織優化kit進行條件的摸索。組織優化芯片上包含8個捕獲區域，每個區域均覆蓋了熒光標記探針，可捕獲mRNA形成帶有熒光標簽的cDNA，隨即可通過熒光成像結果判定比較好透化時間及組織優化條件。2、空間轉錄組測序確定組織優化條件后，即可進行切片、H&E染色及成像、空間轉錄組文庫構建及測序分析流程。

在轉錄組學領域，空間轉錄組也開辟了新世界。Nature Methods在今年1月份將空間轉錄組學評價為2020年度方法，空間轉錄組方法近幾年越來越受到歡迎，它將帶領組學在生物學的研究上進入新的階段。從轉錄組測序到實現單細胞轉錄測序，這一過程為精確認識不同細胞類型提供了巨大的幫助。現在，新的空間轉錄組方法不僅帶來轉錄組信息，同時還提供空間信息，幫研究者更好辨別轉錄的位置，進一步擴展到單細胞分辨率，這會更大程度提升科學家對單個細胞的認識和解讀。個性化制定測序項目方面，滿足從檢測基因到蛋白的多組學測序要求。

為同時獲得空間表達和組織學背景信息，該方案首先將FFPE組織切片置于Visium基因芯片上進行組織學染色和成像，然后利用切片下方Visium基因芯片上的探針進行表達定量。由于FFPE樣本通常存在RNA高度降解的問題，針對FFPE樣本的Visium空間基因表達解決方案無法像新鮮凍存組織樣本一樣利用完整mRNA具有的poly（dA）序列進行mRNA捕獲。該方案采用針對編碼基因的成對RNA模板連接探針（RTL）與mRNA雜交。左側探針（LHS）具有部分Read 2序列，右側探針（RHS）具有合成的poly(A)序列。左右探針與mRNA雜交后彼此連接，而mRNA被RNase降解。組織透化后，被連接的成對探針與芯片上包含空間Barcode、UMI和poly(dT）序列的引物序列捕獲，并且空間Barcode和UMI序列被延伸到成對探針序列上。攜帶空間Barcode的探針序列用于進行測序文庫構建和測序。測序序列上的空間Barcode用于將測序序列定位到組織切片圖像上，UMI用于基因表達定量。測序可準確地分析基因表達差異、基因結構變異、篩選分子標記（SNPs或SSR）等生命科學重要問題。重慶高通量測序空間轉錄組測序

烈冰對于一個細胞群體中的每個細胞單獨進行建庫測序分析。武漢上海烈冰生物空間轉錄組測序服務

烈冰科技作為國內同時擁有10XGenomics和BDRhapsody雙分選平臺的測序服務商及云計算服務供應商，經過多年實戰，擁有豐富的單細胞懸液制備和分選經驗，實測BDRhapsody對能夠高效捕獲粒細胞。針對不同的分選平臺、建庫方法，實戰總結搭建出不同的數據預處理工作流程；烈冰科技NovelBrain®生物大數據平臺能有效支撐生命科學研究、醫療健康等領域對大數據分析的需求。完備的高通量測序實驗平臺，包括NovaSeq6000、10XChromiumX、BDFACSMelody、PANNORAMIC數字切片掃描儀等，配合一支來自海內外名校、多學科交叉型的高素質綜合團隊，為您的科學研究保駕護航。武漢上海烈冰生物空間轉錄組測序服務

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