2016年發表的DR-seq和G&T-seq技術,實現在單細胞內同時進行基因組和轉錄組的測序分析,使得研究人員能夠在分析細胞間基因組差異和基因表達異質性的同時,進一步理解基因組序列差異、拷貝數變異與轉錄組異質性之間的關系.隨后在同一個單細胞內,基于轉錄組、染色質可及性、染色質構象、DNA拷貝數、DNA甲基化、蛋白質豐度或者空間狀態等整合分析的多組學方法也相繼出現。相較于利用不同的單細胞單組學測序方法從一類細胞中分別獲取轉錄組、基因組、表觀遺傳組等進行分析,單細胞多組學測序技術可以從同一個單細胞中同時獲取多種組學數據,可以更好地反映細胞在特定狀態下各組學間的關聯以及復雜的分子調控網絡。單細胞多組學突破了以往單細胞檢測的單一性,可更多樣化。上海烈冰科技單細胞多組學服務機構

單細胞測序實驗再樣本細胞上機分選簽，需要對細胞數量、細胞活性進行準確判斷，這對SingleCell分選標記、建庫、下機數據的質量都具有著決定性的作用。如若細胞計數偏高，將會影響建庫的成功率；計數偏低，則會顯著提高雙細胞的比例；而細胞活率過低，就會使測序數據的利用率大打折扣，因此把好單細胞懸液質量這一關尤為重要。而在鋪板過程中，由于不同操作人員手法具有不可避免的差異，不同的液體流速將直接影響單細胞的入孔效果。因此烈冰生物BDRhapsody單細胞分選平臺配套了專門定制的電動移液器，其具有PrimeTreat、CellLoad、BeadLoad、Wash、Lysis、Retrieval多種操作模式，來對應各種不同的操作。通過已經設定的程序來控制液體的流速，大幅度降低人為操作習慣帶來的差異，保證實驗操作的一致性。濟南烈冰科技單細胞多組學技術支持在單細胞水平上的多組學分析能夠為研究組提供前所未有的臨床和科研大數據。

從單細胞測序描述性分析轉向復雜樣本中不同細胞類型的功能解析，越來越需要一種多組學的細胞生物學視角。通過單細胞多組學——即對不同組學的數據集進行分析和整合——科學家能夠從同一個單細胞來源中檢測多種細胞特征。這些特征包括全轉錄組基因表達、細胞表面蛋白表達、免疫組庫序列（包括T細胞和B細胞受體）以及用于了解表觀基因組調控的開放染色質區域。隨著單個實驗可提供更多信息豐富的數據，研究人員的獲益更多，包括保留珍貴樣本、提高生產力、減少因批次效應引起的錯誤，并節省更多的高科技資源（從資助基金到人員時間）。單細胞測序因其強大的探究疾病--細胞--基因的關系，一度成為高通量測序技術的“天花板”。

針對單細胞測序的細胞數量判斷環節：主要是對細胞數量、基因表達量、測序質量進行整體描述。過濾標準：由于細胞破碎后游離RNA會釋放到環境或孔中，并且測序中也會存在一些死細胞，導致數據存在background值。因此，我們需要設定一定的標準來過濾掉假細胞或死細胞。以10×Genomics為例，細胞數量判斷主要通過分析UMICounts-Barcode曲線斜率拐點，當存在多個斜率拐點的時候，結合預期UMI=500時的細胞數量進行過濾。當斜率拐點低于UMI=500的時候，選擇UMI=500作為細胞的判斷的標準；否則，選擇和預期細胞數量非常接近的拐點作為細胞判斷的位置。這樣我們能夠有效獲得真實的并且在基因數量上可以分析的數據。單細胞多組學的研究對生物標志物的發現，細胞分化發育研究等均有重要意義。

基于橋式PCR技術的簇生成可以將模版鏈迅速擴增成千上萬倍，保證過程中足夠的測序深度。測序時使用特殊標記的dNTP：1）堿基上通過敏感鍵修飾上不同的熒光基團，用于區分ATCG；2）3端使用疊氮基團封閉，保證一次循環只上一個dNTP。每一輪循環結束時，會通過高速熒光顯微鏡記錄熒光圖像，再通入試劑除去熒光基團和疊氮基團，開啟下一循環。通過分析讀取同一位點的熒光，實時獲取模版鏈的堿基序列。由于過程中使用的化學反應并不可控，隨著循環數的增大會出現不同步的情況，因此Illumina的讀長只能限制在200bp左右。單細胞測序技術遍地開花，烈冰服務讓您的生物醫學研究如虎添翼。廈門BD Rhapsody單細胞多組學平臺

深度的單細胞測序數據解讀助力生物健康醫療時代。上海烈冰科技單細胞多組學服務機構

當蜂巢孔內同時落入細胞和磁珠后，接下去可以往BDCartridge板中加入細胞裂解液對細胞進行裂解，使細胞內的RNA與磁珠上的標簽進行結合，完成每個細胞內RNA的捕獲和標記。這時，再將捕獲了RNA的磁珠進行回收，待所有質控結果確認通過后就可以進行后續的RNA反轉錄、cDNA第二鏈合成等實驗操作。而BDCartridge板則需要再進行一次成像，獲得磁珠收集后的掃描圖，判斷磁珠是否已經被有效收集。根據每一步的質控結果，烈冰科技（NovelBio）單細胞測序實驗團隊會根據單細胞分選的實驗結果生成實驗總結報告，判斷每一步驟是否通過質控，并得到捕獲的單細胞數量以及雙細胞比例，對整個實驗進行總結評估。若所有過程通過質控，實驗樣本即可進行下一步實驗操作。上海烈冰科技單細胞多組學服務機構

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