industryTemplate中小樣本篩選, 大樣本中進一步驗證。陜西cfDNA甲基化技術服務專業服務

熒光定量法（Methylight）

這種技術是在MSP技術上發展起來的，在MSP擴增過程中利用熒光染料進行定量。TaqMan? 探針法的應用使得該技術具有更高的精確性。其原理與SNP檢測類似，針對亞硫酸氫鹽處理之后的DN**段，在甲基化位點上會存在單堿基的差異，根據這種差異進行探針設計，隨后進行實時定量PCR，就能夠檢測甲基化的差異。這種方法**的優勢在于其高敏感性和較高通量，且無需在PCR后電泳、雜交等操作，減少了污染和操作誤差。但是TaqMan? 探針訂購費用較高，適用于少數位點大量樣本篩選。 上海RRBS技術服務售后分析N6-甲基脫氧腺苷是原核生物和真核生物的DNA修飾類型之一。

    DNA羥甲基化(5hmC)是被認為是哺乳動物基因組上的第六堿基。Bisulfite-Seq并不能區分甲基化(5mC)和羥甲基化(5hmC)，實際上是5mC和5hmC兩種修飾的混合信號，而通過氧化亞硫酸鹽測序(oxidativebisulfitesequencing,oxBS-Seq)，先將5hmC氧化為甲酰基修飾(5fC)，進而被亞硫酸鹽轉換為堿基U，實現DNA甲基化的精細檢測。而同時對樣本進行BS-Seq和oxBS-Seq測序則可實現對5hmC全基因組，單堿基分辨率的檢測，是羥甲基化檢測的金標準方案。(12):1730-1741.(IF=)作者利用全基因組氧化-亞硫酸鹽測序(WGBS/oxWGBS)得到了肝臟和肺以及配對**組織的全基因組DNA甲基化和羥甲基化圖譜。在活躍的基因中，5hmC在CpGIslandshore中呈***富集狀態，而在CpGIsland中則呈稀缺狀態。對啟動子、基因體和轉錄終止區域的羥甲基化分析，羥甲基化與基因表達有很強的正相關，這表明5hmC是活躍基因的標記，并且可以在由DNA去甲基化調節的基因表達中發揮作用。

Hepatic

stellate cell transdifferentiation involves genome-wide remodeling of the DNA

methylation landscape. J Hepatol. 2016;64(3):661-73. (IF= 14.911)

肝星狀細胞(HSC)是導致肝纖維化發生和進展的關鍵細胞類型。DNA羥甲基化與轉錄***有關，其模式在人類疾病中經常發生改變。研究者采用簡化基因組氧化-亞硫酸鹽測序(RRBS/oxRRBS)檢測靜止和******狀態的大鼠HSC細胞的5mC和5hmC水平，證實了5mC和5hmC在肝纖維化和HSC轉分化過程中的整體變化，表明DNA甲基化/羥甲基化是HSC***的關鍵步驟，可能會為支持纖維生成的分子事件帶來新的見解，并可能為疾病進展提供生物標志物以及潛在的新藥物靶點。 芯片數據如何與二代、三代數據整合。

DNA甲基化作為表觀遺傳學研究的重要范疇，已經越來越受到研究者的關注。近些年來，隨著DNA甲基化與組蛋白甲基化的聯合作用機制、RNA干擾機制及去甲基化機制的發現，使得DNA甲基化研究受到***關注，從醫學領域擴展到動植物研究當中，同時在研究方法上也取得了很大的突破。現在用于DNA甲基化檢測的方法大概有十多種，從應用上來分，大致可以分成兩類：全基因組甲基化分析及特異位點甲基化檢測。下面，我們就這兩大類檢測技術進行分析比較，以便于在實際的科研工作中進行選擇。不同的芯片平臺，各自的實驗過程也是不一樣的。四川單細胞測序技術服務歡迎咨詢

CpG島常位于基因轉錄調控區附近。陜西cfDNA甲基化技術服務專業服務

甲基化敏感性高分辨率熔解曲線分析(MS-HRM)

通過熔解曲線分析可以將單堿基序列的差異轉變成熔解曲線的差異，因此DNA樣本經過亞硫酸氫鹽處理后，甲基化與未甲基化DNA會存在序列差異，這種差異可通過熔解曲線分析來發現。使用該方法進行甲基化分析*需一對引物，相對簡單，不過這種方法對儀器的要求頗高，需要帶HRM模塊的熒光定量PCR儀，并且在進行實時定量PCR過程中，需要使用飽和的熒光染料。利用MS-HRM技術進行甲基化檢測只能對檢測片段整體甲基化情況進行分析，并不能明確每個CpG位點的甲基化狀態。因此這種技術適用于大量樣本的檢測，篩選出感興趣的CPG位點，然后利用其他方法進行單個位點的精確檢測及甲基化程度的精確定量。 陜西cfDNA甲基化技術服務專業服務