體液樣本收集外泌體。1、選擇血清還是血漿?推薦大多數研究選擇血漿。血液凝固過程中血小板會產生大量外泌體,含量占血清中外泌體的50%以上,選擇血漿可避免不必要的影響。2、注意抗凝劑的選擇肝素類抗凝劑與PCR假陰性有關,這可能是因為肝素與引物和/或酶有競爭作用。除了***PCR,肝素可以與外泌體結合,阻止細胞攝取外泌體。因此需要記錄肝素類藥物治療的患者的血液樣本。EDTA和雙嘧達莫(CTAD),CTAD可以阻止血小板的***并***其釋放外泌體。EDTA可能會干擾PCR反應(盡管其程度小于肝素),但是還是優于其他選擇。此外,有研究表明鈣螯合劑可在體外促進外泌體與血小板的結合從而降低經EDTA、或檸檬酸鹽處理后的血液樣本中外泌體的表觀數量。使用肝素時這種影響就不會發生,因此建議在測量外泌體的精確數量時選用肝素。但是也有研究表明肝素可以導致體外條件下外泌體的減少。總之,目前尚需要更多的研究論證抗凝劑是否及如何對外泌體的釋放,作用和下游反應產生特異性影響。 外泌體的優點有很多。天津鑒定外泌體活動
Microenvironment-inducedPTENlossbyexosomalmicroRNAprimesbrainmetastasisoutgrowth。思路:2.那么到底是腦微環境中的哪種細胞,哪種物質介導,致使PTEN丟失呢?作者想想腦內的**細胞周圍無非是:星形膠質細胞,**相關成纖維細胞(CAF),正常成纖維細胞,就把這些細胞分別與**細胞共培養,發現只有與星形膠質細胞共培養后,PTEN的表達明顯下降。接著作者就把星形膠質細胞給干擾掉,把星形膠質細胞內特異性靶向PTEN丟失的microRNA干掉,發現腦轉移的**細胞內的PTEN沒有丟失,瘤體也變小了。得出第二個結論:星形膠質細胞來源的miR-19a沉默了**細胞中的PTEN。 河北提取試劑盒外泌體要多少錢您喜歡外泌體的這些特點嗎?
外泌體的相關成分:⊙外泌體的膜同細胞一樣,是磷脂雙分子層
⊙外泌體膜含有MHC-1/2蛋白,能綁定特異性的肽鏈
⊙外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1、LAMP2
⊙外泌體膜中有膜轉運融合蛋白annexins、RAN、GTPases
⊙外泌體膜上有脂質筏Chol、ceramide、SM、PC,限制膜流動,參與包括跨膜信號轉導、物質內吞、脂質及蛋白定向分選的多種功能
⊙外泌體中含有核酸,包括miRNA、DNA、lncRNA、mRNA;同時還有一些蛋白、脂類也能被包裹到外泌體中
⊙與外泌體產生相關的重要分子:Ral、ARF6、PLD2、RAB家族
⊙一些物質進行外泌體中是特異性的:如hnRNPA2B1能結合lncRNA或miRNA特異性的序列(GGAG/CCCU),進行主動包埋
胸水:
(1) 臨床收集胸水后若不能**時間處理,請于4℃臨時保存(不得超過8 h);
(2) 將收集到的胸水1000 g離心10 min,收集上清液;
(3) 將得到的胸水上清3000 g離心10 min,收集上清;
(4) -80℃冰箱中保存。
腹水:
(1) 臨床收集腹水后若不能**時間處理,請于4℃臨時保存(不得超過8 h);
(2) 將采集到的腹水在4℃下(室溫亦可)離心2000 g,20 min,去除腹水中的殘渣;
(3) -80℃冰箱中保存。
膽汁:(1) 用無菌容器收集膽汁;
(2) 將收集到的膽汁在4℃下,3000 g離心10 min去除細胞沉渣和碎片;
(3) 收集膽汁上清液,4℃或者-20℃長期保存。
Microenvironment-inducedPTENlossbyexosomalmicroRNAprimesbrainmetastasisoutgrowth。思路:1.作者是怎么發現腦轉移的**細胞存在PTEN缺失的呢?又是怎么驗證是依賴于腦的環境?其實這點大家都能想到要怎么做(嘿嘿只是沒有去做做看,去發現些什么),作者正是把不同來源的**不同轉移部位(腦,肺,骨)的基因表達做個熱圖,發現腦轉移的**細胞的共同特點----PTEN丟失,并將原發灶與腦轉移灶**細胞進行免疫組化染色,發現PTEN表達正常的原發灶**細胞,轉移到腦后PTEN丟失。更有趣的是作者發現,把腦轉移的**細胞分離出來培養,PTEN表達回復了;緊接著,作者把這種分離出來的**細胞培養一代后,重新種植到小鼠的腦內和皮下成瘤,發現腦內的PTEN表達又丟失了。得出了***個結論:腦轉移灶的可回復性PTEN丟失依賴于腦微環境。 對于不同的需求我們選擇不同的外泌體系列。廣東血液樣本抽提外泌體售后服務
血清樣品抽提外泌體需要提供多少量?天津鑒定外泌體活動
目前,外泌體研究主要集中在以下幾個方向:開發疾病診斷和預后標志物揭示疾病發病機制作為藥物載體,實現靶向給藥作為疾病***的靶點參與免疫反應調控。外泌體蛋白質組學服務:云生物根據主流外泌體研究策略,開發了一套完整的外泌體蛋白質組學研究技術服務體系。提供從外泌體收集、鑒定到蛋白質組定性定量、數據分析一系列的技術服務項目,確保外泌體研究在同樣技術標準下獲得高質量研究數據。外泌體收集:對于外泌體研究,分離和收**格的外泌體是非常關鍵的一步。目前對于外泌體收集有:超速離心、密度梯度離心、超濾、磁珠免疫、聚合物沉淀與試劑盒提取法等幾種主要方法,各種方法均存在不同優缺點。云生物在現有試劑盒法的基礎上進行大量技術優化,形成了一套針對不同樣品的外泌體提取試劑盒和配套收集方法。可以在提高外泌體收集豐度的同時,***減少雜蛋白殘留,以保證蛋白質組分析階段獲得的數據更加穩定和可靠。 天津鑒定外泌體活動