DNA羥甲基化(5hmC)是被認為是哺乳動物基因組上的第六堿基。Bisulfite-Seq并不能區分甲基化(5mC)和羥甲基化(5hmC)，實際上是5mC和5hmC兩種修飾的混合信號，而通過氧化亞硫酸鹽測序(oxidativebisulfitesequencing,oxBS-Seq)，先將5hmC氧化為甲酰基修飾(5fC)，進而被亞硫酸鹽轉換為堿基U，實現DNA甲基化的精細檢測。而同時對樣本進行BS-Seq和oxBS-Seq測序則可實現對5hmC全基因組，單堿基分辨率的檢測，是羥甲基化檢測的金標準方案。(12):1730-1741.(IF=)作者利用全基因組氧化-亞硫酸鹽測序(WGBS/oxWGBS)得到了肝臟和肺以及配對**組織的全基因組DNA甲基化和羥甲基化圖譜。在活躍的基因中，5hmC在CpGIslandshore中呈***富集狀態，而在CpGIsland中則呈稀缺狀態。對啟動子、基因體和轉錄終止區域的羥甲基化分析，羥甲基化與基因表達有很強的正相關，這表明5hmC是活躍基因的標記，并且可以在由DNA去甲基化調節的基因表達中發揮作用。 cfDNA，cell free DNA，就是血液中游離的自身DNA。上海WGBS技術服務售后服務

    甲基化-焦磷酸測序（升級版）之前的儀器是Q96，也就是說同時可以上96個反應，但是有效讀長只有50bp左右（50bp之后開始衰減，后面的序列只能作為參考）；升級版的Q48，也就是48孔，每次上48個反應，但有效長度可以到100bp左右，而且之前很多不能測過去的特殊結構，現在大部分也能測了。甲基化--------焦磷酸測序的優勢。樣品要求·樣品類型細胞、新鮮組織或DNA樣品·樣品量細胞樣品請提供至少1×106個細胞，組織樣品請提供至少100mg的組織塊或切片，DNA樣品請提供1μg以上的DNA·樣品質量基因組DNA無明顯降解，主帶清晰，大于23Kb，無明顯彌散。OD260/280值在～，濃度≥50ng/μl·樣品保存細胞樣品或新鮮組織塊（切成～50mg的小塊）可液氮凍存后，-80℃保存。DNA樣品可溶于乙醇或超純水中，-80℃保存。樣品保存期間避免反復凍融·樣品運輸樣品置于ml凍存管中，封口膜封好。 浙江MeDIP-Seq技術服務售后分析芯片平臺作為目前比較成熟的篩選工具。

    芯片平臺作為目前比較成熟的篩選工具，已經在很多領域有了相應的應用。多家芯片公司在DNA甲基化這塊兒有了相應的產品提供，其中應用**為***的就Agilent平臺和Illumina平臺，相應的產品包括AgilentHumanCpGIslandMicroarrayKit，InfiniumHumanMethylation27BeadChip和InfiniumHumanMethylation450KBeadChip。另外RocheNimbleGen和Affymetrix也有相應的芯片推出，但是NimbleGen的芯片今年下半年已經停產。不同的芯片平臺，各自的實驗過程也是不一樣的。安捷倫前期采用的甲基化DNA免疫共沉淀（MeDIP）技術。將基因組DNA分成兩份，一份用來做MeDIP，另一份作為對照。兩個樣品都標記熒光(富集的樣品用Cy5標記，對照用Cy3標記)，然后與芯片雜交。芯片上每個探針的Cy5/Cy3強度比例顯示出該區域的甲基化程度。

    焦磷酸測序（Pyrosequencing）技術服務基于QIAGEN公司的PyroMarkQ96ID平臺，能提供基于序列測定的SNP檢測、等位基因頻率分析和甲基化檢測，雜合子缺失及細菌和病毒分型等技術服務。樣品要求·樣品類型細胞、新鮮組織或DNA樣品·樣品量細胞樣品請提供至少1×106個細胞，組織樣品請提供至少100mg的組織塊或切片，DNA樣品請提供1μg以上的DNA·樣品質量基因組DNA無明顯降解，主帶清晰，大于23Kb，無明顯彌散。OD260/280值在～，濃度≥50ng/μl·樣品保存細胞樣品或新鮮組織塊（切成～50mg的小塊）可液氮凍存后，-80℃保存。DNA樣品可溶于乙醇或超純水中，-80℃保存。樣品保存期間避免反復凍融·樣品運輸樣品置于ml凍存管中，封口膜封好，干冰運輸。 甲基化驗證方案是TBS。

DNA甲基化作為表觀遺傳學研究的重要范疇，已經越來越受到研究者的關注。近些年來，隨著DNA甲基化與組蛋白甲基化的聯合作用機制、RNA干擾機制及去甲基化機制的發現，使得DNA甲基化研究受到***關注，從醫學領域擴展到動植物研究當中，同時在研究方法上也取得了很大的突破。現在用于DNA甲基化檢測的方法大概有十多種，從應用上來分，大致可以分成兩類：全基因組甲基化分析及特異位點甲基化檢測。下面，我們就這兩大類檢測技術進行分析比較，以便于在實際的科研工作中進行選擇。羥甲基化DNA免疫沉淀測序是通過5hmC特異性抗體富集結合高通量測序技術。遼寧焦磷酸測序技術服務方案

5hmc是發現的一種修飾堿基，成為哺乳動物的“第六堿基”。上海WGBS技術服務售后服務

GOS2基因靶向甲基化測序確定了一種快速復發、常規致死的腎上腺皮質*亞型

Targeted Assessment of G0S2

Methylation Identifies a Rapidly Recurrent, Routinely Fatal Molecular Subtype

of Adrenocortical Carcinoma. Clin Cancer Res. 2019; 25(11):3276-3288.

(IF= 10.199)

研究者分析了ACC-TCGA數據，在114例腎上腺皮質**的**隊列中鑒定了一個在CIMP高ACC中***被高甲基化并沉默的基因G0S2，并通過高通量BSP得到驗證。G0S2基因CpG島高甲基化**預測不良臨床后果，是ACC快速復發或致死的標志。評估G0S2甲基化對臨床決策是直接可行的，并有助于對侵襲性ACC進行有效輔助***。 上海WGBS技術服務售后服務