數字PCR技術的原理非常簡單，然而在樣品分散（divide）的環節上卻遇到了無法突破的瓶頸。早期的dPCR嘗試使用96孔板到384孔板甚至1536孔板作為分散反應的載體，或者采用類似流式技術的磁珠乳液擴增方法(BEAMing-Beads, Emulsion, Amplification, Magnetics)，2006年 Fluidigm公司推出了***臺商品化的基于芯片的商品化數字PCR系統。2008年德國 Inostics 推出基于磁珠法乳濁液擴增和流式檢測方式的BEAMing dPCR 檢測服務，但這些方法無論在分散程度和數據群體的體量上都無法達到更加精細的要求，時間和耗材成本嚴重限制了dPCR技術的發展。外泌體里面的micRNA含量是非常低的。江蘇數字PCR專業服務

QuantaLife 利用油包水微滴生成技術 開發了微滴式數字PCR技術，這也是**早出現的相對成熟的數字PCR平臺，在運行成本和實驗結果穩定性方面都基本達到了商品化的標準。2011年，QuantaLife 公司被Bio-Rad公司收購，其微滴式數字PCR儀產品更名為QX100型號儀繼續在市場上銷售，這個早期型號為dPCR概念的普及和應用領域的拓展發揮了重要作用。2013年該公司又推出了升級型號QX200。2012年，RainDance公司推出Raindrop型號數字PCR設備，這個設備將其原有的二代測序文庫制備平臺技術平移到數字PCR技術平臺，在高壓氣體驅動下，將每個標準反應體系分割成包含100萬至1000萬個皮升級別微滴的反應乳液， 該公司的創始人之一Darren Link表示這種超高的微滴數目可以為用戶“提供更高的檢測動態范圍，適用于處理更大濃度差異的不同樣品”。江蘇核酸拷貝數定量數字PCR方案增加引物或探針的Tm值，從而實現更短的引物和探針設計。

使用不合適的引物可能會引入引物二聚體、非特異性擴增等，進而影響實驗結果的準確性。在此，小Q建議您在設計引物時需做以下幾個方面的檢查，***需對設計好的引物進行BLAST比對分析，以確保引物的特異性！在數字PCR***定量實驗中，對于基因突變檢測、基因表達差異分析和拷貝數變異鑒定等對實驗精細性要求較高的實驗，需要特異性更高的Assay。QIAGEN基于QIAcuity數字PCR平臺開發并驗證了針對上述常見應用的700多組dPCR LNA Assay，所有Assay均經過鎖核酸修飾來增強其對互補序列的親和力和特異性，進而提高實驗結果的準確性。

數字PCR（Digital PCR-dPCR）技術是一種新的核酸檢測和定量方法，與傳統定量PCR（qPCR）技術不同，數字PCR采用***定量的方式，不依賴于標準曲線和參照樣本，直接檢測目標序列的拷貝數。由于這種檢測方式具有比傳統qPCR更加出色的靈敏度和特異性、精確性，dPCR迅速得到***的應用，這項技術在極微量核酸樣本檢測、復雜背景下稀有突變檢測和表達量微小差異鑒定方面變現出的優勢已被普遍認可，而其在基因表達研究、microRNA研究、基因組拷貝數鑒定、**標志物稀有突變檢測、致病微生物鑒定、轉基因成分鑒定、NGS測序文庫精確定量和結果驗證等諸多方面具有的廣闊應用前景已經受到越來越多的關注。在gDNA長度≥20kb或進行拷貝數變異檢測實驗時，必須對樣品進行酶切處理。

CRISPR-Cas9基因編輯結果驗證：CRISPR-Cas9技術的發明，是基因編輯技術的一大突破，但如何驗證實驗是否成功，仍需要高靈敏度的檢測方法，數字PCR技術可以滿足這一需求。Broad研究所張鋒團隊發明了以CRISPR為基礎的SHERLOCK技術可以對核酸進行高靈敏度的定性檢測，但精確定量評估時仍采取了數字PCR進行確認。*****的伴隨診斷：常用體液來源（如血液，胸腹水，唾液及尿液等）的待檢標本中的DNA，有正常脫落體細胞和病變脫落細胞兩種來源，前者的量遠大于后者。通過微液滴處理能在每個微液滴中有效減少正常體細胞DNA的干擾，實現**標記物的有效檢測，如EGFR，ALK，ROS1，KRAS、BRAF等基因的突變檢測、乳腺*/胃*的HER2基因擴增檢測等，應用于**精細醫學的伴隨診斷。線粒體拷貝數分析與線粒體突變分析。江蘇數字PCR專業服務

微反應單元體積大小一致且穩定是泊松分布準確計算的前提。江蘇數字PCR專業服務

數字PCR 的定量方法不依賴于擴增曲線的循環閾值，因此不受擴增效率的影響，也不必采用看家基因和標準曲線，具有很好的準確度和重現性，可以實現***定量分析。在未來十年內，醫學保健的目標是提供質量高效的個性化醫療。PCR 方法會在實現這個目標的過程中發揮重要作用。相比于傳統的PCR，數字PCR 技術有著無可比擬的優勢和***的應用前景。應用領域：突變/稀有變異檢測（Mutation/Rare variant detection）拷貝數變異（Copy-number variation）進入外周循環（包括血液和糞便）的**組織核酸分析無創產前篩查轉化移植檢測藥理學（Pharmacogenetics）基因表達分析（Geneexpression analysis）-特別針對單細胞或少量細胞或者血清血漿樣品線粒體拷貝數分析與線粒體突變分析數字PCR可以驗證二代測序(NGS)。江蘇數字PCR專業服務