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PEI轉染試劑溶解度

來源: 發布時間:2022-08-08

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轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養板/培養皿。在無血清條件下轉染時,去除生長培養基,替換成無血清培養基,然后滴DNA-PEI復合物。轉染3h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養基。4.孵育細胞和分析結果:在CO2培養箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉染后快7h即可檢測到轉入基因的表達。5.轉染24h后,將細胞傳代至新鮮的生長培養基中(將細胞稀釋10倍以上),在CO2培養箱中37℃孵育過一晚。第二天加入與轉染抗性基因相匹配的篩選藥物。約1~2周可篩選到耐藥性克隆,在這期間需經常更換含篩選藥物的生長培養基。血清兼容PEI轉染試劑PEI轉染試劑如何做殘留檢測?

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穩定轉染方法1.接種細胞:轉染前,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養基稀釋適量DNA。用同樣的培養基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管。

轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養板/培養皿。在無血清條件下轉染時,去除生長培養基,替換成無血清培養基,然后滴DNA-PEI復合物。轉染3h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養基。孵育細胞和分析結果:在CO2培養箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉染后快7h即可檢測到轉入基因的表達。轉染24h后,將細胞傳代至新鮮的生長培養基中(將細胞稀釋10倍以上),在CO2培養箱中37℃孵育過一晚。第二天加入與轉染抗性基因相匹配的篩選藥物。約1~2周可篩選到耐藥性克隆,在這期間需經常更換含篩選藥物的生長培養基。Polysciences的PEI轉染試劑品質如何?

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PEI在于可以應用于體內試驗。當初試驗經費很有限,被逼無奈只能放棄脂質體2000,選擇PEI,以至于相當長的時間內,轉染試驗都不順利。下面是幾點關于PEI轉染的注意要點:1. PEI的使用量可以參照脂質體2000的說明書,所用質粒盡量去內2. 轉染時,一定要把PEI+DMEM加入到質粒+DMEM中,順序不可錯,輕微混勻,靜止20 min3. 轉染后4小時,一定要換液!換含有FBS的完全培養液!因為PEI對細胞毒性太大4. 如果后續試驗涉及到穩定篩選,建議把血清濃度適當提高。PEI轉染試劑的殘留檢測方法怎么開發?40KPEI轉染試劑說明書

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接種細胞:轉染前,用膠原酶消化細胞并計數(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養的器皿,總體積如表1所示,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養基稀釋適量DNA。用同樣的培養基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如Falcon5mL/14mL離心管。轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養板/培養皿。在無血清條件下轉染時,去除生長培養基,替換成無血清培養基,然后滴DNA-PEI復合物。轉染3h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養基。孵育細胞和分析結果:在CO2培養箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉染后快7h即可檢測到轉入基因的表達。請自行確定檢測時間。PEI轉染試劑溶解度

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