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陽離子聚合物PEI轉染試劑作用原理

來源: 發布時間:2024-06-22

PEI在于可以應用于體內試驗。當初試驗經費很有限,被逼無奈只能放棄脂質體2000,選擇PEI,以至于相當長的時間內,轉染試驗都不順利。下面是幾點關于PEI轉染的注意要點:1.PEI的使用量可以參照脂質體2000的說明書,所用質粒盡量去內2.轉染時,一定要把PEI+DMEM加入到質粒+DMEM中,順序不可錯,輕微混勻,靜止20min3.轉染后4小時,一定要換液!換含有FBS的完全培養液!因為PEI對細胞毒性太大4.如果后續試驗涉及到穩定篩選,建議把血清濃度適當提高。PS:事實證明,PEI是可行的,已經做出穩定細胞系了。更多關于Polysciences PEI轉染試劑相關產品信息,歡迎咨詢上海曼博生物!也歡迎關注我們的公眾號:Mine-bio ,私信回復關鍵詞“PEI申請“即可申請PEI試用裝!哪個品牌的PEI轉染試劑比較好呢?陽離子聚合物PEI轉染試劑作用原理

陽離子聚合物PEI轉染試劑作用原理,PEI轉染試劑

穩定轉染方法:1.接種細胞:轉染前一晚,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養基稀釋適量DNA。用同樣的培養基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養板/培養皿。在無血清條件下轉染時,去除生長培養基,替換成無血清培養基,然后滴DNA-PEI復合物。轉染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養基。歡迎關注我們的公眾號:Mine-bio ,私信回復關鍵詞“PEI申請“即可申請PEI試用裝!線性PEI轉染試劑價格用PEI轉染試劑時,一般和DNA的比例是多少呢?

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穩定轉染方法:1.接種細胞:轉染前一晚,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養基稀釋適量DNA。用同樣的培養基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養板/培養皿。在無血清條件下轉染時,去除生長培養基,替換成無血清培養基,然后滴DNA-PEI復合物。轉染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養基。更多關于PEI轉染試劑相關產品技術問題,歡迎咨詢上海曼博生物!也歡迎關注我們的公眾號:Mine-Bio

注意事項質粒質量:請務必使用高質量轉染級無內質粒(推薦使用QIAGEN或者MN公司去內質粒提取試劑盒)。通過260nm光吸收測定DNA濃度,260nm/280nm比值確定DNA純度(比值應該在1.8~2.0的范圍之內)。如有可能,請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質粒的完整性。細胞條件:使用適當保存和經常傳代的健康細胞。確保培養基沒有被細菌、或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞,請在轉染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養細胞。更多關于Polysciences PEI轉染試劑相關產品信息,歡迎咨詢上海曼博生物!也歡迎關注我們的公眾號:Mine-bio ,私信回復關鍵詞“PEI申請“即可申請PEI試用裝!哪個品牌的PEI轉染試劑性價比比較高?

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PEI在于可以應用于體內試驗。當初試驗經費很有限,被逼無奈只能放棄脂質體2000,選擇PEI,以至于相當長的時間內,轉染試驗都不順利。下面是幾點關于PEI轉染的注意要點:1.PEI的使用量可以參照脂質體2000的說明書,所用質粒盡量去內2.轉染時,一定要把PEI+DMEM加入到質粒+DMEM中,順序不可錯,輕微混勻,靜止20min3.轉染后4小時,一定要換液!換含有FBS的完全培養液!因為PEI對細胞毒性太大4.如果后續試驗涉及到穩定篩選,建議把血清濃度適當提高。PS:事實證明,PEI是可行的,已經做出穩定細胞系了。近期還有PEIfree申請活動,歡迎咨詢上海曼博生物!歡迎關注我們的公眾號:Mine-bio,回復關鍵詞“申請PEI”,即可參加活動!更多關于Polysciences PEI轉染試劑相關產品信息,歡迎咨詢上海曼博生物!用PEI轉染時,一般和DNA的比例是多少呢?PEI轉染試劑哪個品牌好

有哪些比較好的轉染試劑嗎?陽離子聚合物PEI轉染試劑作用原理

注意事項質粒質量:請務必使用高質量轉染級無內質粒(推薦使用QIAGEN或者MN公司去內質粒提取試劑盒)。通過260nm光吸收測定DNA濃度,260nm/280nm比值確定DNA純度(比值應該在1.8~2.0的范圍之內)。如有可能,請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質粒的完整性。細胞條件:使用適當保存和經常傳代的健康細胞。確保培養基沒有被細菌、或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞,請在轉染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養細胞。更多Polysciences PEI轉染試劑等相關產品信息,歡迎咨詢上海曼博生物!近期還有PEI試用裝申請活動,可關注我們的公眾號:Mine-bio,后臺回復關鍵詞“PEI申請”參加活動陽離子聚合物PEI轉染試劑作用原理

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