無細胞蛋白表達技術（CFPS）正在徹底改變合成生物學、生物技術和藥物開發(fā)等關鍵領域，它通過突破傳統大腸桿菌（E. coli）等細胞表達系統的固有局限，實現了三大he xin優(yōu)勢：更快的生產周期更靈活的合成條件調控；可表達毒性蛋白或體內難以合成的復雜結構蛋白；這使得CFPS成為zhi liao性蛋白開發(fā)、功能基因組學和高通量蛋白質篩選不可或缺的工具。由于擺脫了細胞代謝的束縛，CFPS可實時優(yōu)化反應條件，從而明顯提升蛋白產量并優(yōu)化生產效率。隨著工程化裂解物與自動化設備的進步，體外蛋白表達技術將成為生命科學工具箱中的常備利器。hek293蛋白表達實驗流程

無細胞蛋白表達技術（CFPS）是一種在體外（試管中）直接合成蛋白質的技術，利用細胞裂解物（如大腸桿菌、酵母或哺乳動物細胞提取物）中的核糖體、酶、tRNA等翻譯元件，無需活細胞即可快速生產目標蛋白。he xin特點：高效快速：省去細胞培養(yǎng)步驟，幾小時內完成表達（傳統方法需數天）。靈活可控：可自由添加非天然氨基酸、同位素標記物或翻譯調控因子，定制特殊蛋白。兼容復雜蛋白：適合表達毒性蛋白、膜蛋白等傳統細胞系統難以生產的類型。哺乳動物蛋白表達難點優(yōu)化后的??原核體外蛋白表達??已廣泛應用于抗體篩選、酶工程等領域。

無細胞蛋白表達技術（CFPS）根據反應體系的設計可分為分批式（Batch）、雙層式（Bilayer）和連續(xù)交換式（CECF）三種主要形式。分批式是Zui基礎的形式，反應在單一試管中進行，操作簡單但受限于底物耗盡和副產物積累，表達時間通常只4小時，適合小規(guī)模篩選（如Promega的試劑盒）。雙層式通過密度差異將反應液與緩沖液分層，延長反應時間至8-20小時，日本CFS公司的產品采用此設計。連續(xù)交換式（CECF）通過半透膜連接反應室與供應室，持續(xù)補充底物并移除副產物，可將反應延長至24小時，產量明顯提高（如德國RTS系統的1mL及以上規(guī)模產品）

從裂解物來源看，無細胞蛋白表達技術主要分為原核系統和真核系統。原核系統以大腸桿菌S30提取物為主，成本低、耐受性強，適合表達簡單蛋白或引入非天然氨基酸，但缺乏復雜翻譯后修飾能力。真核系統包括兔網織紅細胞裂解物（RRL）和麥胚提取物（WGE），前者適合哺乳動物蛋白的高效表達，后者對植物和病毒蛋白更優(yōu)，且能處理長鏈RNA，但成本較高。此外，昆蟲細胞提取物系統近年也用于復雜蛋白的修飾研究。英國nuclera 高通量微流控蛋白表達篩選系統可助力支持無細胞蛋白表達技術，如想了解更多信息，歡迎咨詢官方代理商上海曼博生物！添加 2 mM 鎂離子可使 ??大腸桿菌體外蛋白表達??產量提高 60%。

凋亡因子（如caspase-3）、細菌du su（如白喉du suA鏈）在細胞內表達會引發(fā)宿主死亡。體外蛋白表達系統通過無細胞環(huán)境規(guī)避毒性效應：在添加線粒體膜組分的兔網織紅細胞裂解物中，全長BAX蛋白（21kDa）表達量達0.8mg/mL，并成功模擬其介導的細胞色素C釋放過程（CellDeathDiffer.,2024）。該系統還可表達HIV蛋白酶（活性>95%），用于高通量抑制劑篩選，加速抗病毒藥物開發(fā)。真he dan白的糖基化修飾（如抗體Fc段N-糖）是zhi liao性蛋白功能的he xin。傳統體外蛋白表達因缺乏高爾基體，糖基化效率不足5%。突破性方案是在HEK293裂解物中添加重組糖基轉移酶復合體（含GnT-I、GnT-II、FUT8），使曲妥珠單抗的復雜雙觸角糖型比例升至80%（Science,2022）。結合UDP-GlcNAc底物連續(xù)補料，糖均一性（G0F:G2F=1:1.2）媲美哺乳細胞表達，為下一代抗體偶聯藥物（ADC）提供新生產路徑。通過灌流式反應器將CHO細胞體外蛋白表達??周期縮短至72小時，單批次產量突破5g/L。his蛋白表達行業(yè)動態(tài)

體外蛋白表達技術使??致死性靶點研究成為可能??，為新藥開發(fā)提供關鍵依據。hek293蛋白表達實驗流程

國內生物醫(yī)藥行業(yè)對CFPS的價值認知不足，傳統企業(yè)更依賴成熟的細胞表達系統（如CHO、大腸桿菌）。許多藥企認為無細胞蛋白表達技術只適用于“科研級小試”，對其在藥物開發(fā)（如ADC定點偶聯）、mRNA疫苗抗原快速制備等工業(yè)化潛力持觀望態(tài)度。同時，無細胞蛋白表達技術在復雜蛋白表達（如糖基化抗體）上的局限性也削弱了市場信心。相比之下，歐美已形成“CRO+藥企”的協同生態(tài)（如Moderna與CFPS服務商合作），而國內缺乏此類模范案例，導致技術推廣缺乏驅動力。hek293蛋白表達實驗流程