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寧波正揚生物rcAAV核酸提取常見問題

來源: 發布時間:2023-12-27

南京正揚生物自主研發生產的宿主細胞殘留核酸提取試劑盒利用磁珠法的原理,提取純化生物制品中殘留的微量宿主細胞DNA/RNA,產品裝量為100reaction/盒,試劑組分包括樣品稀釋液、裂解液1、裂解結合液、磁珠懸浮液、洗滌液A、洗滌液B、洗脫液,裂解液1需放置于2-8℃儲存,其余組分均常溫儲存即可,切勿冷藏或冷凍。試劑盒有效期為12個月。在使用時,需自備金屬浴/水浴鍋、渦旋混勻器、掌上離心機、高速離心機等設備。

南京正揚生物自主研發生產的宿主細胞殘留核酸提取試劑盒利用磁珠法的原理,提取純化生物制品中殘留的微量宿主細胞DNA/RNA,產品使用事項包括以下幾點:1.磁珠懸浮液嚴禁冷凍和離心,以免損傷磁珠,磁珠使用前務必充分混勻。2.裂解液結合液、洗滌液A、洗滌液B在低于10℃時可能出現白色結晶,若出現沉淀,請37℃水浴重新溶解后使用。3.請盡量在完成樣本純化處理當天進行后續的DNA檢測,以保證檢測結果的準確性。4.請務必仔細閱讀本試劑盒說明書,并嚴格按照操作步驟完成操作。 宿主細胞殘留核酸提取試劑盒的用途。寧波正揚生物rcAAV核酸提取常見問題

磁珠法核酸提取過程中的常見誤區--試劑使用的越多,提取效果越好裂解效果不好?多加點裂解液。洗滌效果不好?多加點洗滌液。這是很多客戶在使用試劑盒中的慣性思維。但是對于磁珠法而言,每增加一部分液體體積,就減少了更多的磁珠碰撞幾率,而降低磁珠碰撞幾率,會導致吸附率的大幅度下降。所以很多時候,雖然增加裂解液和洗滌液確實能夠起到增強裂解和增強洗滌的作用,但磁珠法提取的中是磁珠吸附核酸的效率,無法保證磁珠碰撞效率是不能保證核酸提取效率的,所以單純增加試劑使用量改善提取效果并不一定完全有效。廣州復制型腺相關病毒核酸提取原理大腸桿菌殘留核酸提取。

磁珠法核酸提取過程中的常見誤區--樣品取用越多,提取效果越好在樣本不夠新鮮或者核酸含量本身就很少的情況下,往往核酸提取效果不好,很多老師就會采用多取樣本的方式增加核酸提取量。但簡單地增加樣本取樣量,有時會引入過多的雜質,超出裂解液裂解能力,也會使提取效率降低,所以并不推薦通過簡單的增加樣本取樣量的方式來達到增加提取量的目的。如果確實是由于樣本量不足而引起的提取量過低,建議在前處理先經過富集或者濃縮步驟再開始提取。或者增加裂解的完全性,使更多的核酸暴露出來也是一種解決方法。

隨著基因檢測、個性化給、產前診斷等的普及,在生物行業各領域都追求高通量、自動化的如今,傳統核酸提取方法的局限愈來愈明顯,而磁珠法核酸提取的優勢則愈來愈明顯:R能夠實現自動化、大批量操作;R不使用傳統方法中的苯、氯仿等有毒試劑,安全無毒完全符合現代環保理念;R與核酸的特異性結合使得提取的核酸純度高、濃度大。R操作簡單、用時短;R穩定可靠:避免人工操作引起的差異及錯誤,結果穩定,重復性好;

傳統核酸提取方法和磁珠法核酸提取的優缺點比較:傳統核酸提取法磁珠法技術簡單高質量、高通量手工提取自動化流程操作繁瑣、費時費力免去了復雜的人工提取不適合大量樣品核酸提取減少酚類、氯仿等有機試劑對操作人員傷害不適合臨床分子診斷極大滿足如今對核酸提取效率的需求 Vero細胞殘留核酸提取。

磁珠法核酸提取常見問題之磁珠結塊:導致磁珠結塊的可能原因:①磁珠吸附了過多雜質,包括蛋白、脂質、多糖等;②磁珠粒徑太小;③洗滌完畢,乙醇干燥時間過長。④磁珠磁吸附時間過長;⑤操作中途含磁珠的樣品管離心速率過高、離心時間過長;磁珠結塊的解決辦法:①優化裂解液、結合液配方,將雜質裂解并充分消化;②選擇粒徑較大的微球;③縮短干燥時間;④控制磁珠吸附時間,磁分離時,待液體變澄清即可將液體吸棄,并及時將EP管從磁力架上取出;⑤操作過程中切勿高速或長時間離心;宿主細胞殘留核酸提取相關操作步驟。寧波支原體DNA提取注意事項

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為什么原本效果很好的磁珠,換了一個核酸提取試劑盒效果就降低了?磁珠的種類是非常多的,粒徑大小不同,分散性不同,磁響應時間不同,包被基礎基質不同,外層修飾官能團不同,包被密度不同,官能團臂長不同,會導致磁珠特性差異很大。所以不同磁珠所適應的實驗和體系也是不同的。在原有體系中表現優異的磁珠,是經過一系列篩選和方法摸索后,篩選出的蕞組合。如果將磁珠換入新的體系,出現提取效果降低也很正常。多數情況下,磁珠和試劑體系都要做一定時間的配合調整。寧波正揚生物rcAAV核酸提取常見問題

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