南京正揚生物科技有限公司自主研發生產的復制型逆轉錄病毒檢測試劑盒簡介：RCR基因拷貝數檢測試劑盒適用于定量檢測逆轉錄病毒載體生產的細胞醫治產品和基因醫治產品中復制型逆轉錄病毒RCR，如生產病毒的細胞庫、終末細胞、病毒載體及CAR-T細胞等。采用熒光探針RT-PCR的方法檢測逆轉錄病毒載體上的特定序列，試劑盒配套有RCR定量參考品，用于精確定量樣品中復制型逆轉錄病毒RCR的拷貝數。南京正揚生物科技有限公司自主研發生產的復制型逆轉錄病毒檢測試劑盒簡介：RCR基因拷貝數檢測試劑盒適用于定量檢測逆轉錄病毒載體生產的細胞醫治產品和基因醫治產品中復制型逆轉錄病毒RCR，如生產病毒的細胞庫、終末細胞、病毒載體及CAR-T細胞等。采用熒光探針RT-PCR的方法檢測逆轉錄病毒載體上的特定序列，試劑盒配套有RCR定量參考品，用于精確定量樣品中復制型逆轉錄病毒RCR的拷貝數。復制型病毒檢測試劑盒。深圳qPCR法病毒檢測原理

qPCR法RCL/RCR病毒檢測：目前許多CAR-T企業采用Q-PCR方法直接測定CAR-T終產品中的VSV-G序列或psi-gag序列，因考慮到CAR-T細胞種產品一般需要新鮮輸注的特殊情況，基于細胞培養法的RCL/RCR檢測方法周期較長，建議在細胞產品制備過程中進行多面控制(如對慢病毒載體及生產終末細胞采用基于細胞培養方法測定RCL/RCR，以確保生產工藝過程中不存在RCL的風險)，細胞終產品階段可采用qPCR檢測法快速放行。qPCR法RCL/RCR病毒檢測：目前許多CAR-T企業采用Q-PCR方法直接測定CAR-T終產品中的VSV-G序列或psi-gag序列，因考慮到CAR-T細胞種產品一般需要新鮮輸注的特殊情況，基于細胞培養法的RCL/RCR檢測方法周期較長，建議在細胞產品制備過程中進行多面控制(如對慢病毒載體及生產終末細胞采用基于細胞培養方法測定RCL/RCR，以確保生產工藝過程中不存在RCL的風險)，細胞終產品階段可采用qPCR檢測法快速放行。。鄭州RT-PCR法病毒檢測原理南京正揚生物開發的復制型慢病毒檢測試劑盒的靈敏度是多少？

實時熒光定量PCR（qPCR）技術在生物制品質量控制方面應用非常普遍，如宿主細胞殘留DNA檢測，鼠源、禽源等外源病毒檢測，微生物快檢（支原體、分枝桿菌、細菌、真  菌等），復制型病毒檢測（RCL、RCR、rcAAV等）、質粒拷貝數檢測及其它工藝雜質檢測等。qPCR檢測結果以擴增曲線圖呈現，正常擴增曲線為S型，分為基線期、指數擴增期、線性擴增期和平臺期；線形光滑、拐點清晰，基線平直或略微下降，無明顯上揚。定量檢測實驗中，對標曲的要求主要從斜率（與擴增效率相關）和R2兩方面進行考察，要求斜率滿足-3.8~-3.1（對應擴增效率為83.3%~110%），R2滿足高于0.99。

復制性慢病毒/復制性逆轉錄病毒檢測的必要性：RCL/RCR會同逆轉錄病毒載體一樣，整合在細胞基因組中，從而產生因整合導致的原ai基因激  活，抑ai基因破壞或者使促細胞生長的因子高度表達而造成二次仲瘤的風險。因其具有復制性，即產生具有復制能力的病毒，增加了因整合而造成的二次仲瘤的風險。雖然目前在病毒制備體系方面改進很多，很大程度上降低了RCL/RCR產生的風險，但是仍不能完全排除，美國FDA要求對于γ-逆轉錄病毒載體和慢病毒載體，需要在整個生產過程及不同階段進行RCL/RCR檢測，需要對載體生產用主細胞庫、工作細胞庫、生產終末細胞、載體上清液及在體外培養超過4天的載體轉到細胞進行檢測，復制型病毒檢測試劑盒要求有哪些？

復制型病毒/病毒載體回復突變（ReplicationCompetentVirus,RCV），可產生于病毒載體制造過程中的所有步驟當中。并且，RCV感   染宿主細胞后能隨宿主細胞在培養液中增殖、擴增對人體健康具有嚴重的隱患，是免疫細胞治     療類產品，如CAR-T產品的主要安全性風險之一。近年來，CAR-T細胞制備過程中，伴隨載體的不斷升級優化，重組產生的復制型逆轉錄病毒/慢病毒(ReplicationCompetentRetrovirus/Lentivirus,RCR/RCL)逐漸降低，但產生RCR/RCL的風險隱患至今仍不能完全排除。由2022年5月發布的《體外基因修飾系統藥學研究與評價技術指導原則（試行）》指出RCR/RCL檢測作為安全性檢測在細胞藥物的研發和生產過程中至關重要，相關產品不得檢出RCR/RCL，可知病毒載體相關產品中，RCR/RCL病毒檢測至關重要。為什么要做復制型病毒檢測？鄭州RT-PCR法病毒檢測原理

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目前針對RCL復制型慢病毒檢測的方法差異很大，例如，實時定量PCR方法(Q-PCR法)會因為細胞或質粒DNA殘留導致假陽性；合胞體形成測定法需要慢病毒具有完整的能力并且包含Env元件，該方法的靈敏度還未得到驗證；標志物補救測定法尚不清楚來自載體生產過程中的RCL是否會濟活標志物；逆轉錄酶活性測定法(PERT)不能區分RCL和載體顆粒，且細胞中固有的內源性  病毒顆粒也會影響檢測結果的判斷；細胞培養法檢測時間過長。如您有需要，歡迎聯系！深圳qPCR法病毒檢測原理