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體外培養(yǎng)環(huán)境中,細胞自身沒有抗污染的能力,即使培養(yǎng)基會添加抗 生素,抵抗污染的能力也很有限。常見的微生物污染為細菌、真 菌、支原體和病毒等,其中又以支原體污染蕞為普遍棘手。一旦污染了支原體的細胞將無法正常形成單克隆,而且細胞轉(zhuǎn)染過程容易死亡,細胞實驗效率極低。為了維持實驗的穩(wěn)定,必須對所有的實驗使用到的細胞進行支原體檢測。南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的支原體檢測試劑盒,利用qPCR的原理進行支原體檢測,試劑盒具備操作簡便、檢測快速、靈敏度高等優(yōu)點,是支原體檢測的優(yōu) 選方法。支原體檢測的好處有哪些?寧波qPCR法支原體檢測公司
南京正揚生科科技有限公司自主研發(fā)的支原體檢測試劑盒的優(yōu)點有哪些?①操作簡單:樣品操作十分簡便,無需自配試劑,且樣品無需離心富集,節(jié)省大量時間;②樣品需求量少:只需500uL樣品進行前處理即可,無需進行樣品離心富集。③檢測用時較短:蕞快2h即可出結(jié)果,是CGT領域客戶的優(yōu) 選;④合規(guī)驗證:整個檢測體系(包括提取和檢測)由全球蕞大第三方實驗室Eurofins權(quán) 威認證,驗證報告具備公正性、權(quán) 威性,符合中、美、日、歐申報要求;上海便捷支原體檢測操作流程生物制品支原體檢測。
隨著我國生物藥以及細胞治 療相關產(chǎn)業(yè)的發(fā)展,相關的法律法規(guī)也在不斷健全。支原體檢測就是其中必不可少的一項。準確進行支原體檢測,是避免外源因子污染,保證產(chǎn)品質(zhì)量的重要質(zhì)控手段。根據(jù)我國藥典的相關規(guī)定,如下領域需要進行支原體檢測:主細胞庫、工作細胞庫、病毒種子批、對照細胞以及臨床治 療、生產(chǎn)終末細胞、檢定細胞、病毒種子批和病毒類疫苗的病毒收獲液以及原液等。另外,其他一些規(guī)定、指導意見中,細胞培養(yǎng)相關材料如培養(yǎng)基、胰酶、臨床治 療用干細胞和免疫細胞、新生牛血清以及雜交瘤細胞等也需要進行檢測。
在進行支原體檢測之前,對支原體DNA進行提取的目的是為了從樣品中純化和富集支原體的DNA,以便進行后續(xù)的檢測和分析。以下是進行支原體DNA提取的主要原因和目的:去除抑制物質(zhì):某些樣品中可能含有對PCR或其他分子檢測方法有抑制作用的物質(zhì),如酶抑制劑、有機溶劑等。支原體DNA提取過程可以幫助去除這些抑制物質(zhì),提高后續(xù)PCR或分子檢測的成功率。保護DNA完整性:支原體DNA在樣品中容易受到外界環(huán)境的影響和降解。提取過程中的適當處理可以保護DNA的完整性,防止其在提取過程中受到損傷。如何購買支原體檢測試劑盒?
qPCR法支原體檢測的原理:PCR反應過程中可通過加入熒光標記的特異性探針檢測PCR產(chǎn)物生成的量。帶有一對熒光分子的探針與樣品中DNA通過堿基互補配對的原則進行結(jié)合,隨著PCR反應的進行,Taq聚合酶合成DNA,同時沿5’-3’方向水解DNA探針,一對熒光分子隨著探針的水解而分開,發(fā)出熒光信號。通過連續(xù)監(jiān)測反應體系中熒光讀數(shù)的變化,可即時反映特異性擴增產(chǎn)物量的變化。具備靈敏度高、特異性好、操作簡單、用時較短等優(yōu)點。日本藥典JPXVⅢ〈G3-14-170〉對NAT法支原體檢測產(chǎn)品有關性能驗證的要求,包括檢測限(LOD)、專屬性、耐用性、可比性。其中對于檢測限的描述及要求如下:檢測限是一個分析方法對樣本中目標核酸能檢測出的蕞低量,但無需準確定量。在建立分析方法的檢測限時,需要確定核酸擴增分析的陽性臨界值。陽性臨界值是95%的測試中能被檢測到的每體積樣本中的目標序列拷貝數(shù)。確定陽性臨界值需對表征過的且已校準(CFU或核酸拷貝數(shù))的支原體參考株或國際標準株做一系列的梯度稀釋,并于不同時間(日間)進行檢測以檢查測試間的差異。南京正揚的支原體檢測試劑盒的價格。南京支原體檢測公司
細胞被支原體污染后的特征及支原體檢測試劑盒使用方法。寧波qPCR法支原體檢測公司
用qPCR法進行支原體檢測時,出現(xiàn)擴增曲線末尾起跳的原因可能是什么?①陰性質(zhì)控或無模板對照曲線末尾出現(xiàn)起跳情況,考慮環(huán)境存在污染所致,建議對實驗環(huán)境做好控制,如使用低吸附帶濾芯搶頭和低吸附ep管,保證實驗分區(qū)(樣品處理區(qū)、試劑保存及配制區(qū)、PCR擴增區(qū))、用DNA清除劑處理環(huán)境等。②待測樣品曲線末尾出現(xiàn)起跳情況,在確保陰性質(zhì)控或無模板對結(jié)果正常的情況下,可以進行復測,復測結(jié)果一致,則考慮是樣品中待測物濃度較低所致。寧波qPCR法支原體檢測公司