磁珠法核酸提取的基本原理:核酸結合到磁珠上主要依靠靜電作用、疏水作用和氫鍵作用。細胞或組織在裂解液作用下,其中的DNA/RNA被釋放出來。此時經過表面修飾的超順磁性氧化硅納米磁珠即與核酸進行“特異性結合”,形成“核酸-磁珠復合物”。然后在外加磁場的作用下,復合物即分離出來。蕞后經過洗脫液洗去非特異性吸附的雜志、去鹽、純化后,即得到欲提取的核酸物質。磁珠法核酸提取即可通過手工提取也可通過自動化核酸提取平臺進行提取。宿主細胞殘留核酸提取過程中有哪些因素會導致提取效果不佳?深圳RCL核酸提取公司
磁珠法核酸提取一般可以分為四步:裂解——結合——洗滌——洗脫洗滌:核酸的高電荷磷酸骨架使其比蛋白質、多糖、脂肪等其他生物大分子物質更具親水性,根據它們理化性質的差異,用選擇性沉淀、層析、密度梯度離心等方法可將核酸分離、純化。用無水乙醇沉淀DNA,這是實驗中蕞常用的沉淀DNA的方法。乙醇的優點是可以任意比和水相混溶,乙醇與核酸不會起任何化學反應,對DNA很安全,因此是理性的沉淀劑。當加入乙醇時,乙醇會奪去DNA周圍的水分子,使DNA失水而易于聚合。洗脫:加水或者EB破壞高鹽環境,形成低鹽環境,使DNA從磁珠上脫落。廣州復制型腺相關病毒核酸提取常見問題南京正揚生物自主研發的核酸提取試劑有哪些?
核酸提取時,加標回收率的定義及注意事項:加標回收率是指在測定樣品的同時,于同一樣品的子樣中加入一定量的標準物質進行測定,將其測定結果扣除樣品的測定值,以計算回收率。加標回收設置的注意事項:①同一樣品的子樣取樣體積必須相等;②各類子樣的測定過程必須按相同的操作步驟進行。③加標量不能過大,一般為待測物含量的0.5~2.0倍,且加標后的總含量不應超過方法的測定上限。④加標物的濃度宜較高,加標物的體積應很小,一般以不超過原始試樣體積的1%為好。
南京正揚生物自主研發生產的宿主細胞殘留核酸提取試劑盒利用磁珠法的原理,提取純化生物制品中殘留的微量宿主細胞DNA/RNA,產品使用事項包括以下幾點:1.磁珠懸浮液嚴禁冷凍和離心,以免損傷磁珠,磁珠使用前務必充分混勻。2.裂解液結合液、洗滌液A、洗滌液B在低于10℃時可能出現白色結晶,若出現沉淀,請37℃水浴重新溶解后使用。3.請盡量在完成樣本純化處理當天進行后續的DNA檢測,以保證檢測結果的準確性。4.請務必仔細閱讀本試劑盒說明書,并嚴格按照操作步驟完成操作。南京正揚自主研發的核酸提取試劑盒的原理是什么?
CHO宿主細胞殘留DNA檢測中,磁珠法核酸提取回收率偏低的原因有哪些?樣品問題:樣品存在抑制;操作原因:①洗滌液配制操作,外加有機溶劑的體積或純度不正確;②漏加或少加試劑組分;③磁珠保存不當,冷凍過;④在提取過程中將樣品管高速離心或長時間離心;⑤磁力架不匹配,磁性較弱;自動化核酸提取設備原因:①自動化核酸提取設備的磁分離方式設計有問題、設備的磁場弱;②使用自動化設備進行核酸提取時所用的參數設置不合適;其他原因:①耗材非低吸附耗材;②耗材中有抑制物;③實驗室存在抑制物;核酸提取的方法有哪些?上海病毒核酸提取特點
宿主細胞核酸提取能用于支原體提取嗎?深圳RCL核酸提取公司
核酸提取的質量標準之紫外光譜法:即使是蕞小的樣品(1~2L)也可以用紫外光譜法進行測量。DNA、RNA和單個核苷酸和寡核苷酸在260納米處吸收紫外線。在1厘米的比色皿中,1.0的A260相當于50μg/mLDNA和40μg/mLRNA。A260/A280比率提供了關于分離的核酸純度的信息。純的DNA和RNA的比率分別為1.8和2.0。污染物如蛋白質、苯酚通常以不同的波長吸收光線。如果在230、280或320納米處也有吸收,這表明分離物中存在雜質。如果該比率小于1.8,則可能是蛋白質的污染。A230/260的比率>1也說明了這一點。深圳RCL核酸提取公司