實時熒光定量PCR（qPCR）技術(shù)在生物制品質(zhì)量控制方面應(yīng)用非常普遍，如宿主細胞殘留DNA檢測，鼠源、禽源等外源病毒檢測，微生物快檢（支原體、分枝桿菌、細菌、zhen菌等），復(fù)制型病毒檢測（RCL、RCR、rcAAV等）、質(zhì)?？截悢?shù)檢測及其它工藝雜質(zhì)檢測等。qPCR檢測結(jié)果以擴增曲線圖呈現(xiàn)，正常擴增曲線為S型，分為基線期、指數(shù)擴增期、線性擴增期和平臺期；線形光滑、拐點清晰，基線平直或略微下降，無明顯上揚。定量檢測實驗中，對標曲的要求主要從斜率（與擴增效率相關(guān)）和R2兩方面進行考察，要求斜率滿足-3.8~-3.1（對應(yīng)擴增效率為83.3%~110%），R2滿足高于0.99。國家對Vero宿主細胞殘留DNA檢測的要求有哪些？上海E1B殘留DNA檢測試劑盒

宿主細胞殘留DNA檢測：實時熒光定量PCR法宿主細胞殘留DNA檢測的原理和方法：實時熒光定量PCR是基于PCR擴增時，在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，產(chǎn)物的增加可以通過熒光信號指示，通過實時監(jiān)控PCR體系中的熒光信號，對樣本中初始模板進行定量分析。實時熒光定量PCR可實時檢測產(chǎn)物的生成量，通過加入已知濃度的標準樣品繪制標準曲線，然后根據(jù)待測樣品在標準曲線中的位置推算初始模板的濃度，從而達到檢測宿主細胞殘留DNA含量的目的。寧波宿主細胞殘留DNA檢測原理畢赤酵母宿主細胞殘留DNA檢測的質(zhì)量控制。

為什么要做宿主細胞殘留DNA檢測?眾所周知，大部分生物制劑是不經(jīng)過胃腸道直接進入體內(nèi)，所以除了生物活性外，相關(guān)部門對藥品中雜質(zhì)的含量要求非常嚴格。其中，宿主細胞殘留DNA因為具有特別的潛在安全風(fēng)險，一直是監(jiān)管機構(gòu)關(guān)注的重點。生物制品中的重組蛋白藥、抗體藥、疫苗等產(chǎn)品是用連續(xù)傳代的動物細胞株表達生產(chǎn)，雖然經(jīng)過嚴格的純化工藝，但產(chǎn)品中仍有可能殘余宿主細胞DNA。這些殘余DNA可能帶來傳染性或致瘤性風(fēng)險，比如殘留DNA可能攜帶HIV病毒或Ras  ai基因。

南京正揚生科科技有限公司自主研發(fā)的CHO宿主細胞殘留DNA檢測試劑盒的優(yōu)點有哪些？①重復(fù)性好，同一樣品重復(fù)檢測20次，CV＜15%；②提取回收率好，尤其對于低濃度樣品；③操作簡便，無需自行配制試劑；④檢測時間短，從樣品提取純化到出結(jié)果只需2.5h；⑤適應(yīng)性強，針對不同機型，不同實驗室條件，檢測結(jié)果穩(wěn)定；⑥可提供自動化服務(wù)，自動化完成樣品核酸提取純化；⑦貨期短，供應(yīng)快；⑧完善的售后服務(wù)；

生物制品殘留的宿主細胞DNA會帶來免疫原性、至瘤性和傳染性的風(fēng)險，探針雜交法和熒光探針法已不能滿足產(chǎn)品質(zhì)量控制的要求，正逐步被發(fā)達國家藥典淘汰。南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的CHO宿主細胞殘留DNA檢測試劑盒采用Taqman探針熒光定量PCR原理，可以定量檢測生物制品樣品中殘留的CHO宿主細胞DNA。本檢測試劑盒可與南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的宿主細胞殘留DNA提取試劑盒搭配使用，對樣本中殘留的CHO細胞微量DNA進行準確定量分析。 生物制品中宿主細胞殘留DNA檢測概述。

《中國藥典》2020版已收載三種方法用于外源性宿主細胞殘留DNA檢測，其中較為常用方法的為qPCR技術(shù)，該方法不僅可準確定量，且靈敏度較高可達到fg級，很大提高檢測的準確性。但因其需精密和昂貴的qPCR儀、相關(guān)檢測試劑盒價格較高，較難在基層及偏遠地區(qū)實施，且其有著復(fù)雜的樣品前處理和相對較長的檢測時間，應(yīng)用于快檢的難度比較大。對于企業(yè)生產(chǎn)實時監(jiān)控而言，特別需要一種可以快速的，低廉的試劑盒，其可以檢測抗體中殘留DNA是否符合標準，同時不需要昂貴的設(shè)備。CFDA對宿主細胞殘留DNA檢測的要求。寧波宿主細胞殘留DNA檢測原理

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宿主細胞殘留DNA檢測：《美國藥典》和《歐洲藥典》將高靈敏度、高特異性的qPCR法和非序列特異性的DNA結(jié)合蛋白法作為宿主細胞殘留DNA檢測的推薦方法；《中國藥典》則收錄了特異性高的定量熒光探針qPCR法和半定量的DNA探針雜交法以及非序列特異性的熒光染色法。然而，熒光染色法/免疫閾值法這兩種非序列特異性檢測結(jié)果不能區(qū)分究竟是生產(chǎn)過程污染、檢測造成的假陽性污染還是工藝缺陷引起的DNA殘余，難以避免檢測值虛假偏高的情況，存在檢測局限性。上海E1B殘留DNA檢測試劑盒