為什么我們需要敏感的支原體檢測？細胞培養和細胞系的使用在生物研究和生物制藥產品的生產中是必不可少的。當發生支原體感   染時，后果——感   染的疫苗、代價高昂的藥物開發中斷、不可靠的細胞培養試驗、不可重復的結果、失去多年的工作、失去寶貴的細胞系——可能是毀滅性的。此外，支原體對細胞培養中常用的抗   生素不敏感。因此，必須每月以蕞靈敏和蕞可靠的方法對細胞系進行支原體的常規檢測。如今，實時熒光定量PCR(qPCR)是一種首    選的支原體檢測方法，因為它準確、靈敏且省時。與常規PCR不同，qPCR允許實時觀察支原體DNA的DNA擴增，因為特異性引物在熒光探針存在的情況下與其靶序列結合，從而導致DNA擴增和熒光增強。此外，qPCR比常規PCR更具特異性和敏感性。與標準PCR一樣，支原體qPCR需要內部、陽性和陰性對照，并且可能受到實驗室支原體DNA污染的影響。qPCR法支原體檢測和方法驗證。深圳支原體檢測方法學

CAR-T藥物的生產制造周期一般需要2-4周，終產品的常規檢測項目如外源因子檢測和內毒     素檢測等一般還需要花費幾天甚至幾十天的時間，傳統的支原體檢測方法如培養法和指示細胞法，全部檢測周期長達一個月。由于細胞治     療產品等新型生物制品的特殊性（貨架期短），導致常規方法均無法滿足細胞制品生產及患者回輸的時限要求。由于傳統方法檢測時間長、效率低，且部分微生物由于在指定試驗條件下不易生長、樣品量少，致使無菌檢測能力受限。南京正揚生物科技有限公司自主研發生產的支原體檢測試劑盒操作便捷，只需2h即可出結果，是專注于CAR-T領域客戶的選擇。南京細胞支原體檢測產品支原體檢測方法有哪些。

細胞培養時做支原體檢測是至關重要的。支原體在自然界分布普遍，無細胞壁，直徑為0.1-0.3μm，且形態易變，極易通過除菌過濾器。細胞培養被支原體污染是極普遍的問題，在細胞培養過程中如果在顯微鏡下發現破碎的細胞很多，需要頻繁換液才能維持傳代培養的時候，即應懷疑支原體污染。面對支原體污染給細胞培養帶來的巨大難題，世界各國開始重視，并相繼建立了細胞庫，對細胞質量進展控制，效果明顯，支原體污染的問題得以限制。目前已知能污染細胞的支原體有20多種以上。細胞培養過程中遇到的支原體95%都來自于以下四種支原體：口腔支原體、精氨酸支原體、豬鼻支原體、萊氏無膽甾支原體，其中萊氏無膽甾支原體為牛源性。

qPCR法支原體檢測程序中，陰性對照（NCS）和空白對照（BLK）的區別：陰性對照（NCS）：為樣品稀釋液經核酸提取純化后所得，在提取純化前同待測樣品一樣需加入IC，NCS用于監測提取環節是否存在紕漏，比如：操作問題、試劑性能異常、提取環節出現污染等情況；空白對照（BLK）：在PCR檢測環節加入的對照品，BLK為純水，不含IC/支原體核酸；BLK用于監測檢測環節是否出現污染，如：檢測試劑盒污染、試劑配制間的環境污染等；南京正揚生物科技有限公司自主研發生產的支原體檢測試劑盒利用Taqman熒光探針原理，定性檢測樣品中是否有支原體污染。本試劑盒涵蓋100多種支原體DNA序列，檢測快速，專一性強，靈敏度高，性能可靠，且能提供國際第三方檢測機構出具的性能驗證報告，符合中、日、美國家的藥典要求。本公司還提供多樣化提取試劑盒，支持手工、自動化提取，自動化提取試劑盒又包括預分裝和非預分裝規格，客戶可根據實際情況進行訂購。生物制品放行時支原體檢測的金標準。

為什么要做支原體檢測？支原體是蕞小和蕞簡單的自我復制生命體。由于支原體體積小（100nm），缺乏剛性的細胞壁，因此肉眼無法檢測到支原體，它們可以透過0.2μm的標準過濾膜，并對很多抗   生素都具有抵抗力。支原體污染是細胞培養中的一個主要問題，不止影響實驗結果的有效性，更會影響細胞工程制藥的質量和安全性。在細胞培養過程中，支原體感   染發生率達到63%，因而細胞培養過程中被支原體污染是一個世界性的難題。當細胞（特別是傳代細胞）被支原體污染后，細胞內的DNA、RNA及蛋白表達發生改變，而細胞的生長率一般并未發生明顯的影響，因而細胞被支原體污染一般難以察覺。南京正揚的支原體檢測試劑盒的裝量是多少？南京肺炎支原體檢測優點

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目前實驗室常用的支原體檢測方法有培養法、熒光指示細胞法、PCR法、掃描電子顯微鏡法，這些方法各有優缺點。PCR法檢測支原體的方法蕞為快速、靈敏、取樣量少，既可做細胞本身，也可做細胞上清的檢測，同時可以檢測多種支原體的污染，是目前常用的檢測手段。PCR法是20世紀80年代中期建立起來的一種體外DNA擴增實驗，其基本原理是酶促DNA合成反應，即在DNA模板、引物和脫氧核糖核酸存在下，經DNA聚合酶的作用，使DNA鏈擴增延伸。該實驗具有靈敏度高、特異性強、檢測快速的特點。深圳支原體檢測方法學