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青海GlySERIASIdeS蛋白酶蛋白組學

來源: 發布時間:2024-10-21

為什么客戶想在他們的工作試用Genovis的FabRICATOR(IdeS)。FabRICATOR的高特異性(在鉸鏈下方有單個消化位點)以及它對IgG種和亞類表現出活性的事實使其成為高效表征一系列不同分子的理想工具。FabRICATOR的另一大優勢是速度。在大多數IgG上,您可以在短短30分鐘內生成F(ab’)2和Fc/2片段,這一速度簡化了方法開發,并允許快速有效的中層表征,使客戶能夠在不比做完整質量實驗長太多的時間內獲得更多關于分子的信息。Genovis發現更多的緩沖液與溶液中的FabRICATOR消解相容(更多信息)。Genovis已經測試了PBS和150mM醋酸銨,pH7,結果良好。并且應該也適用于FabRICATORHPLC。然而,緩沖液的離子強度會影響抗體片段在FabRICATORHPLC(IdeS)色譜柱上的保留,并且IgG1亞基需要至少100-150mM鹽才能洗脫為單個窄峰。其他IgG亞類或融合蛋白可能需要對緩沖液組成進行一些優化。Genovis的FabULOUS (SpeB) 是一種半胱氨酸蛋白酶。青海GlySERIASIdeS蛋白酶蛋白組學

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在Genovis,我們的策略是幫助客戶進行中級(或亞基)分析,這是我們的工作,特別是我們的蛋白質酶切產品。完整質量和肽圖譜是蛋白質表征的常用方法,我們發現,與簡單但信息有限的完整質量和高度復雜但信息豐富的肽圖譜相比,中級方法具有優勢。通過執行中級描述,您可以生成從完整的質量實驗中獲得的所有信息,具有額外的優勢。在對抗體進行完整質量分析時,很難明確地識別某些修飾。質譜儀器正在改進,可以更有效地分析更大的分子,但通過使用我們的SmartEnzymes,如IdeS,可以將抗體分解成更小的片段,這提高了這些實驗可以執行的分辨率,因此,增加了鑒定修飾的信心。此外,你不僅能夠更好地識別修改,而且你能夠將它們定位到蛋白質上的單個結構域,這是你在完整水平上無法做到的。陜西FabRICATOR ZIdeS蛋白酶蛋白組學可精確定位特定的修飾。而無需肽圖分析,可以較少的手動操作時間快速完成。

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Genovis的FabRICATOR(IdeS)酶 可用于 IgG 的所有人類亞類以及人源化和嵌合 IgG。該酶對其他物種的 IgG 也有活性,包括來自大鼠、猴子、兔子和綿羊的某些類別的 IgG。因此,FabRICATOR的高特異性在某些情況下會使其對鉸鏈區域的突變敏感,并損害酶活性。來自小鼠 IgG2a 和 IgG3 的片段可以由 FabRICATOR Z 生成,與 FabRICATOR 相比,FabRICATOR Z 在消化這些 IgG 方面具有更高的效率。然而,小鼠 IgG1 在鉸鏈下方具有不同的序列,并且不被 FabRICATOR Z 消化。對于這種抗體種類,FabULOUS 和 FabULOUS Fab 試劑盒可用于制備 Fab 片段。

與IdeS不同,Genovis的IgMBRAZOR是一種獨特的IgM特異性蛋白酶,可在重鏈中CH2結構域下方的一個特定位點消化人IgM,產生均質的F(ab')2和Fc片段。該酶能夠對復雜和高分子量的人IgM進行中級分析,從而促進疫苗、zhiliao和診斷等過程中的IgM表征。獨特-可實現IgM的中級表征和質量控制;快速–在30分鐘內生成均勻的F(ab')2和Fc片段;高度特異性–人IgM重鏈中的一個消化位點。IgMBRAZOR是一種獨特的IgM特異性酶,可在重鏈中CH2結構域下方的一個特定位點消化人IgM,產生F(ab')2和Fc片段。消化在30分鐘內完成,并且由于酶的特異性,如果孵育時間延長,則不存在過度消化的風險。該酶在pH值為5.5至9.0時具有活性,不需要還原條件或輔助因子即可發揮活性。良好的活性是在37°C下,但也可以在室溫下使用增加孵育時間進行消化。IgMBRAZOR在大腸桿菌中表達。該酶含有His標簽,分子量為38kDa。FabRICATOR(IdeS蛋白酶) 的高特異性也意味著相同的消化方案可以作為平臺方法應用于許多不同的抗體。

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大多數zhiliao抗體攜帶人 IgG1 骨架,雙特異性或多特異性形式的開發正在迅速增加。此類抗體的分析需要特異性酶來表征特性,例如單價結合、二硫鍵擾亂和配對 Fc 糖基化。傳統方案包括使用木瓜蛋白酶和 Lys-C 的酶消化,這需要優化以大限度地減少過度消化并獲得足夠的產量。Genovis的半胱氨酸蛋白酶 FabALACTICA (IgdE) 在鉸鏈上方的一個特定位點消化人 IgG1,以產生完整的 Fab 和 Fc 片段。該酶在大多數人IgG1 上也具有活性,其中鉸鏈區域以下的突變已被引入。為了證明FabALACTICA的性能,我們消化了不同的人IgG1抗體,并使用RP-HPLC分析了所得片段。用FabALACTICA消化后觀察到的定義峰顯示了不同人IgG1抗體的均質片段生成和強大的酶性能。FabALACTICA 酶也可用于生成完整的 Fc 片段。IgASAP酶是獨特的酶促工具,可實現 IgA 的中級表征和質量控制,用于疫苗診斷的開發過程。青海FabRICATOR ZIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

這就是為什么Fc/2和GLP-1肽都被檢測為幾種變體。青海GlySERIASIdeS蛋白酶蛋白組學

抗體由于其大小和復雜性,是一種難以表征的分子。偶聯藥物有效載荷是對抗Ai癥等疾病的一種有吸引力的方法,但進一步增加了異質性的復雜性和風險。抗體藥物偶聯物 (ADC) 需要像任何其他基于 IgG 的生物制藥一樣進行仔細和詳細的表征,并且需要適當的分析工作流程。Genovis的FabRICATOR(IdeS)酶將ADC消化成其亞基,可以詳細表征這類復雜的藥物。Genovis的內切糖苷酶 IgGZERO和 GlycINATOR 還可以研究完整的 ADC,但降低復雜性并提高分辨率。青海GlySERIASIdeS蛋白酶蛋白組學

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