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在生物工藝中,核酸酶的主要作用是高效消化宿主細(xì)胞DNA(HCD),并將其分解成足夠小的片段,以便在下游純化過(guò)程中去除。雖然大多數(shù)核酸酶可以在生理鹽條件下高效地將裸DNA降解成微小片段,比如Benzonase和SANs都可以把dsDNA分解成小于8nt的寡核苷酸鏈,但實(shí)際生產(chǎn)中的核酸污染情況更加復(fù)雜。HCD通常以染色質(zhì)形式存在,與細(xì)胞裂解碎片、病毒顆粒等結(jié)合在一起,影響核酸酶的識(shí)別及剪切。因此,HCD去除的關(guān)鍵在于——核酸酶如何在復(fù)雜的生產(chǎn)體系中識(shí)別并剪切HCD。 SAN HQ高鹽核酸酶具有熱不穩(wěn)定的特性,在還原劑存在條件下,50℃、30min孵育即可失活;湖州70921-160高鹽核酸酶工廠直銷(xiāo)
ArcticZymes Technologies于2017年推出了SAN HQ高鹽核酸酶及其對(duì)應(yīng)的SAN HQ ELISA kit。該試劑盒原理是采用雙抗夾心法定量檢測(cè)各種生物制品的中間品、半成品和成品中SAN HQ高鹽核酸酶的殘留含量,特異性的anti-SAN作為捕獲抗體偶聯(lián)在96-well plate,生物素Biotin標(biāo)記anti-SAN作為檢測(cè)抗體,鏈霉親和素-HRP偶聯(lián)物起到信號(hào)放大作用,TMB是終反應(yīng)底物。該試劑盒特異識(shí)別SAN HQ高鹽核酸酶,對(duì)其它核酸酶沒(méi)有特異性結(jié)合。它的定量范圍是0.4-25.6ng/ml,檢測(cè)精確度高RSD<=15%,2-8℃條件下保存12個(gè)月。常州70921-160高鹽核酸酶聯(lián)系方式ArcticZymes Technologies成立于20世紀(jì)80年代后期,總部位于挪威北部的特羅姆瑟(Troms?)。
市售的SAN HQ高鹽核酸酶有三個(gè)規(guī)格,分別是25kU、500kU及5MU,分別滿足研發(fā)初期及大規(guī)模生產(chǎn)各階段的要求。通過(guò)SDS-PAGE檢測(cè)蛋白純度在98%以上。基于ArcticZymes Technologies的30年的酶學(xué)開(kāi)發(fā)及大規(guī)模生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn),SAN HQ的生產(chǎn)體系穩(wěn)定,產(chǎn)品純度高,批次一致性好,無(wú)蛋白酶活性。廠家開(kāi)發(fā)出特異的緩沖液體系,使SAN HQ保存起來(lái)更加穩(wěn)定,-15℃ - -30℃條件下有效期3年左右。研究數(shù)據(jù)表明,經(jīng)過(guò)5-6次的反復(fù)凍融,SAN HQ高鹽核酸酶活性沒(méi)有明顯變化。
AAV病毒滴度通常分為物理滴度和infection滴度。物理滴度一般是指基因組滴度或者衣殼滴度。在測(cè)定AAV的含量時(shí),通常采用基因組滴度或者衣殼滴度作為單位,其中基因組滴度為攜帶基因組的AAV的濃度,衣殼滴度為AAV物理顆粒的濃度。基因組滴度一般采用qPCR、ddPCR、染料法、UV/Vis等方法來(lái)測(cè)定;衣殼滴度主要是通過(guò)ELISA、HPLC等方法來(lái)測(cè)定。AAV基因組滴度檢測(cè)的關(guān)鍵在于盡可能徹底去除AAV衣殼外的HCD殘留,減少污染核酸對(duì)qPCR或ddPCR的影響。經(jīng)典方法是加入常規(guī)核酸酶(如Dnase I、Benzonase等)消化AAV衣殼外的HCD殘留,然后加入Proteinase K破碎病毒衣殼,進(jìn)行后續(xù)檢測(cè)。經(jīng)過(guò)對(duì)比發(fā)現(xiàn),用SAN HQ高鹽核酸酶替代常規(guī)核酸酶處理AAV病毒,能夠更高效去除衣殼外的核酸殘留,qPCR或ddPCR結(jié)果重復(fù)性更高、更穩(wěn)定。ArcticZymes于2005年在Olso證券交易所上市,精于規(guī)模化生產(chǎn)獨(dú)特特性的酶產(chǎn)品。
ArcticZymes Technologies推出了SAN HQ高鹽核酸酶和M-SAN HQ中鹽核酸酶,為生物工藝領(lǐng)域提供了革新性、更高效的方案來(lái)解決大規(guī)模生產(chǎn)中核酸殘留問(wèn)題。此前,受限于鹽濃度和核酸酶活性的負(fù)調(diào)控效應(yīng),行業(yè)在核酸殘留去除效果和酶成本之間尋找平衡,更多的是讓工藝選擇適應(yīng)酶。此后,行業(yè)可以根據(jù)工藝具體需求而選擇更合適的酶產(chǎn)品,既能達(dá)到理想的去除效果,又能輕松控制酶用量及綜合成本,真正實(shí)現(xiàn)讓酶適應(yīng)工藝選擇。SAN HQ和M-SAN HQ為行業(yè)提供更高效率的解決方案。徐州高鹽核酸酶售后服務(wù)哪家好呢,歡迎咨詢(xún)上海倍篤生物 。合肥倍篤高鹽核酸酶代理商
SAN HQ高鹽核酸酶在高鹽濃度下活性更適,DNA去除效率更高。湖州70921-160高鹽核酸酶工廠直銷(xiāo)
離子交換層析 (IEC) 是一種簡(jiǎn)單、通用且經(jīng)濟(jì)高效的技術(shù),已成為許多載體純化的關(guān)鍵步驟。IEC分為陰離子/陽(yáng)離子交換柱,其中AEC(Anion-exchange chromatography)適用于AAV純化,是大規(guī)模AAV生產(chǎn)中去除空衣殼的主要手段。AAV衣殼亞種之間因表面電荷的差異導(dǎo)致不同的的等電點(diǎn)。空衣殼PI在6.3左右,包裝了完整基因組DNA后的病毒顆粒PI大致為5.9。AAV與基質(zhì)之間的靜電相互作用正是取決于衣殼的等電點(diǎn)(pI)和緩沖液的pH值。基于這一原理在正電荷固定相上進(jìn)行樣品的分離純化,去除雜質(zhì)(如空衣殼和部分衣殼),并有效地回收目的載體。湖州70921-160高鹽核酸酶工廠直銷(xiāo)