引物設計與條件優化場景:新引物開發時,需測試不同退火溫度(Tm 值)以避免非特異性擴增。例:針對某基因設計 5 對引物,通過梯度 PCR 同時測試每對引物在 55℃~65℃范圍內的比較好退火溫度,直接篩選出特異性條帶**亮的組合。優勢:傳統方法需多次**實驗,梯度 PCR *需 1 次運行即可完成多條件驗證。復雜模板的擴增優化場景:擴增富含 GC 堿基對(>70%)的模板、長片段 DNA(>5kb)或存在二級結構的序列時,需精細優化溫度參數。例:擴增某病毒全基因組(約 15kb)時,通過梯度功能測試不同延伸溫度(如 68℃~72℃)對產物完整性的影響,確定比較好延伸條件。杭州柏恒梯度PCR儀RePure-A是一款專為提高PCR反應效率和靈活性而設計的實驗設備。江蘇96孔基因擴增儀PCR儀經銷商
儀器操作設置放置樣品板:將密封好的 96 孔板平穩放入 qPCR 儀的樣品槽,確保孔位對齊,蓋緊儀器艙門。程序設置(通過儀器軟件):預變性:通常 95℃,30 秒 - 5 分鐘(熱啟動酶,使模板完全變性)。循環階段(變性→退火→延伸,同時采集熒光):變性:95℃,5-15 秒(使 DNA 解鏈)。退火 / 延伸:根據引物 Tm 值設置溫度(一般 55-65℃),20-30 秒(引物結合并延伸,熒光染料 / 探針在此階段發光)。循環次數:通常 35-40 次(根據模板濃度調整)。溶解曲線(可選):用于驗證擴增產物特異性,程序為 95℃ 15 秒→60℃ 1 分鐘→緩慢升溫至 95℃,同時連續采集熒光(觀察是否有單一峰,排除非特異性擴增或引物二聚體)。熒光通道選擇:根據使用的熒光染料 / 探針類型選擇(如 SYBR GreenⅠ 對應 FAM 通道,TaqMan 探針根據標記熒光選擇)。樣本信息錄入:在軟件中標記樣品類型(如標準品、未知樣本、陰性對照、空白對照)及孔位對應關系。無錫QPCR基因擴增儀PCR儀RePure系列PCR儀采用了梯度溫控技術,能夠在實驗中準確調節溫度梯度,可以輕松地優化PCR反應條件。
1. **參數溫度均勻性:各孔位溫度差異≤0.5℃,避免擴增效率不一致。熱循環重復性:多次運行同一程序時,溫度曲線重合度高,保證實驗可重復性。兼容性:支持不同規格反應管(如 0.2mL 管、96 孔板)和試劑體系(如 Taq 酶、高保真酶)。2. 選型建議科研場景:梯度 PCR 儀 + 低通量模塊,便于優化反應條件。臨床檢測:高通量普通 PCR 儀或 qPCR 儀,兼顧效率和定量需求。野外或現場檢測:便攜式 PCR 儀(如基于微流控芯片,電池供電),適合應急檢測(如**防控)。
梯度 PCR 儀是一種具備多溫度梯度功能的聚合酶鏈式反應儀器,其**優勢在于可在同一反應板上設置不同的溫度梯度(如橫向或縱向溫度梯度),允許用戶同時優化多個退火溫度或其他循環參數,***提升實驗效率。這類儀器廣泛應用于引物優化、條件摸索和復雜擴增反應,是科研與方法開發的關鍵工具。. 溫度梯度功能實現方式:通過半導體加熱模塊或金屬導熱板的分區控溫,在反應板的不同孔位間形成線性溫度梯度(如 30℃~70℃,梯度范圍可達 40℃)。例:橫向梯度模式下,第 1 列孔為 50℃,第 12 列孔為 60℃,中間列按 0.5℃/ 列遞增,一次性測試 12 個不同退火溫度。優勢:無需重復實驗即可篩選比較好溫度,減少試劑消耗和時間成本。RePure系列PCR儀能快速找到合適的退火溫度,顯著提高了實驗的成功率和可靠性。
儀器維護每次使用后,清潔樣品槽內的液滴或雜質(用無塵紙蘸 75% 酒精擦拭),防止腐蝕或影響溫度均勻性。長期不用時,定期開機運行空程序,避免部件老化;儀器出現異常(如溫度失控、熒光信號異常)時,及時聯系維修,勿自行拆解。實驗設計合理性對照設置:必須包含陰性對照(已知陰性樣本)、空白對照(反應體系,無模板),確保結果可靠性。重復設置:每個樣本至少做 3 次生物學重復和技術重復,減少實驗誤差。循環次數:避免循環次數過多(超過 45 次),否則可能導致非特異性擴增,影響定量準確性。柏恒RePure系列PCR儀在擴增效果方面表現優異,具有高靈敏度和穩定性,能夠實現快速、高效的DNA擴增。熒光基因擴增儀PCR儀價格
RePure-(D)B的雙槽設計能夠滿足同時進行不同PCR反應的需求,減少實驗時間和成本。江蘇96孔基因擴增儀PCR儀經銷商
轉基因作物檢測應用:擴增轉基因作物中的外源基因(如抗蟲基因Bt、抗除草劑基因EPSPS),用于安全性評估和監管篩查。案例:歐盟法規要求對食品中的轉基因成分進行 PCR 定性檢測。2. 作物育種與品種鑒定應用:利用 SSR(簡單序列重復)、AFLP(擴增片段長度多態性)等分子標記技術,輔助選育抗病、抗逆品種,或鑒定種子純度。案例:通過 PCR 擴增特定品種的特征性 DN**段,區分雜交種與常規種。3. 畜禽疫病檢測應用:檢測動物病原體(如非洲豬瘟病毒、禽流感病毒)的核酸,用于疫病防控和檢疫。江蘇96孔基因擴增儀PCR儀經銷商