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來源: 發(fā)布時間:2021-09-08

試劑篇:藥物分離主要方法,(1) 根據(jù)分子大小不同的分離方法:透析和超過濾(利用蛋白質(zhì)分子不能通過半透膜的性質(zhì));密度梯度離心(蛋白質(zhì)在介質(zhì)中離心時質(zhì)量和密度較大的顆粒沉降較快);凝膠過濾(一種柱層析)(2) 利用溶解度差別分離:等電點沉淀法(由于蛋白質(zhì)分子在等電點時凈電荷為零,減少了分子間靜電斥力,因而容易聚集沉淀,此時溶解度**小);鹽溶與鹽析(利用一定濃度鹽溶液增大或減小蛋白質(zhì)的溶解度)(3) 根據(jù)電荷不同的分離方法,主要包括電泳和離子交換層析分離;(4) 蛋白質(zhì)的選擇吸附分離(利用顆粒吸附力的強弱不同達到分離目的)(5) 根據(jù)配體特性的分離——親和層析(利用蛋白質(zhì)分子與另一種稱為配體的分子能夠特異而非共價地結合這一生物性質(zhì))(6) 低溫有機溶劑沉淀法: 用與水可混溶的有機溶劑,甲醇,乙醇或**,可使多數(shù)蛋白質(zhì)溶解度降低并析出,此法分辨力比鹽析高,但蛋白質(zhì)較易變性,應在低溫下進行。預活化填料哪家有賣的?浙江定制試劑代理廠家

蛋白純化試劑NiSmartBeads是一種新型IMAC填料,螯合有非常牢固的Ni離子,具體性能見表1。NiSmartBeads主要應用于分泌到真核培養(yǎng)液上清中的組氨酸標記蛋白的捕獲和純化,可以在含有EDTA及DTT的情況下進行目的蛋白高效的純化。NiSmartBeads有很強的組分兼容性,適用于***底物及鹽濃度的緩沖條件2.純化流程2.1緩沖液的準備可使用下列推薦緩沖液,也可根據(jù)自己的使用習慣配置不同的緩沖液體系,基本原理就是低咪唑上樣,高咪唑洗脫,或者高pH上樣,低pH洗脫。緩沖液在使用前比較好用0.22μm或者0.45μm濾膜過濾除菌。浙江多肽試劑銷售價格His標簽蛋白表達純化方案。

常州天地人和純化試劑CoSmartBeads6FF產(chǎn)品介紹,CoSmartBeads6FF是一種新型IMAC填料,螯合有非常牢固的Co離子,具體性能見表1。Co2+離子半徑大于Ni2+,因此Co2+結合His標簽能力小于Ni2+。CoSmartBeads6FF主要應用于分泌到真核培養(yǎng)液上清中的組氨酸標記蛋白的捕獲和純化,可以在含有EDTA及DTT的情況下進行目的蛋白高效的純化。CoSmartBeads6FF有很強的組分兼容性,適用于***底物及鹽濃度的緩沖條件,本信息由上海楚知生物科技有限公司提供

蛋白純化試劑抗體純化rProteinA/GBeads4FF純化流程:2.4.1抗體吸附1)取適量的rProteinA/GBeads4FF加入到2ml離心管中,800rpm離心1min,吸棄上清。2)加入0.5ml平衡液,懸浮填料(使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下,起到保護蛋白的作用),800rpm離心1min,吸棄上清。再重復兩次。3)向步驟2)平衡的填料中加入抗體溶液,懸浮填料,室溫下置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手工輕輕翻轉(zhuǎn)離心管,約30min后,800rpm離心1min,收集上清液,留待檢測。4)向3)的填料中加入0.5ml的洗雜液,懸浮填料,進行清洗,去除非特異性吸附的雜蛋白,800rpm離心1min,吸棄上清。再重復兩次。2.4.2抗體交聯(lián)(備選)如果需要將抗體和目標抗原復合物共同洗脫,請忽略本步驟,直接進行2.4.3。50ul-1ml填料量均可以按照以下步驟操作,無需額外增加交聯(lián)液體積。1)向清洗過的填料中加入1ml交聯(lián)液,800rpm離心1min,吸棄上清。2)再向其中加入1ml含20mMDMP(dimetylpimelimidatedihydrochloride)的交聯(lián)液,此試劑需要現(xiàn)用現(xiàn)配,懸浮填料,在室溫下置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手工輕輕翻轉(zhuǎn)離心管,促使緩沖液和填料充分接觸,約30min后,800rpm離心1min,吸棄上清。一步純化檢測原核,酵母或哺乳性動物細胞表達的標簽蛋白。

蛋白純化試劑Ni Smart Beads純化流程2/3常州天地人和生物科技有限公司平衡液:20mM磷酸鹽,0.5MNaCl,pH7.4洗雜液:20mM磷酸鹽,0.5MNaCl,0-5mM咪唑,pH7.4洗脫液:20mM磷酸鹽,0.5MNaCl,250mM咪唑,pH7.4注:為了減少宿主細胞蛋白的洗脫,建議在洗雜液中加入低濃度的咪唑。為了消除一些離子作用蛋白的吸附,可以在溶液中加入0.5M-1.0MNaCl。可以采用低pH值洗脫或與咪唑結合,如pH2.5-5.0。2.2樣品準備1)將細胞培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至離心杯,7,000rpm(7,500×g),離心15min取上清。如果使用預裝柱,樣品在使用前比較好用0.22μm或者0.45μm濾膜過濾除菌。2)樣品中含有可耐受范圍內(nèi)試劑,不需要透析或濃縮,可以直接上樣。2.3樣品純化流程1)將NiSmartBeads裝入合適的層析柱,層析用5倍柱體積的平衡液進行平衡,使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下,起到保護蛋白的作用。2)將樣品加到平衡好的NiSmartBeads中,保證目的蛋白與Ni2+充分接觸,提高目的蛋白的回收率,收集流出液。3)用10-15倍柱體積的洗雜液進行清洗,去除非特異性吸附的雜蛋白,收集洗雜液。4)使用5-10倍柱體積的洗脫液,收集洗脫液,即目的蛋白組分。中壓預裝柱HiPur系列HiSelect Ni 6FF。廣東抗體純化試劑哪里買

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