二代測序是一個強大的功能平臺，它可以同時給數以萬計的DNA分子進行測序。由于這種可以多個樣本同時測序的能力，在個性化醫療、遺傳疾病和臨床診斷等方面，二代測序也就是高通量測序開創了**性的領域。早在1900年代就發明的Sanger測序法，成為了DNA測序的黃金法則，即便到了***它仍被***用來進行常規測序和NGS數據的驗證。它利用高保真DNA聚合酶生成與單鏈DNA模版互補的拷貝。在每個反應中，一個可以特異性識別模版的單鏈引物，可以從3端開始啟動DNA合成，根據堿基互補配對原則，脫氧核糖核苷酸或簡單的核苷酸是一個接一個的與模版配對。NGS平臺自身的軟件大多是做分析及報告的，樣本管理或者實驗管理一般需要單獨上信息化，對整體業務效率還是有明顯提高的。 邁杰轉化醫學圍繞生物標志物研究、伴隨診斷開發，建立了完善的核酸組學、蛋白組學、細胞組學技術平臺。湖北多靶點邁杰轉化醫學NGS平臺創新服務

    降低引物的擴增效率，也需要重新設計并合成引物。3、初次復合擴增時，各個引物在反應體系中的濃度均為μm；之后對引物濃度進行調整，獲得進行pcr擴增時各個引物的**佳濃度。經過上述步驟，獲得引物組合。引物組合由120條引物組成，用于檢測68個基因座。各個基因座的名稱、擴增基因座對應的引物名稱和引物的核苷酸序列依次見表1中第1列、第2列和第3列。進行pcr擴增時各個引物的**佳濃度見表1中第5列。表1各個基因座對應的引物在hg38人類參考基因組(hg38人類基因組的信息見網址./goldenpath/hg38/bigzips/)中的pcr擴增產物的長度和核苷酸序列詳見表2。各個str基因座的pcr擴增產物的長度范圍分布見圖1。表2三、基于二代測序技術檢測68個基因座的試劑盒的制備基于二代測序技術檢測68個基因座的試劑盒包括引物混合物；引物混合物由步驟二制備的120條引物混合而成。實施例2、實施例1制備的試劑盒檢測標準品2800m的str分型及其應用一、實施例1制備的試劑盒檢測標準品2800m的str分型1、dna樣本準備取標準品2800m，用超純水稀釋，獲得濃度為1ng/μl的標準品2800m水溶液。2、pcr擴增以標準品2800m水溶液為模板，采用實施例1步驟三制備的引物混合物進行pcr擴增，得到pcr擴增產物。四川Claudin18.2邁杰轉化醫學NGS平臺來電咨詢邁杰轉化醫學具備從樣本制備到H&E，IHC、FISH、RNAscope及多重免疫組化等全套組織病理和分子病理檢測能力。

2015年一項針對4853例各類實體瘤NGS研究表明，FGFR的功能異常發生于7.1%的**樣本中，其中基因擴增、基因突變以及染色體重排分別占比為66%、26%及8%，FGFR1、FGFR2、FGFR3及FGFR4在發病患者中占比為3.5%、1.5%、2.0%及0.5%。發生率較高的**有尿路上皮*、膽管*、乳腺*、子宮內膜*、鱗狀上皮*等，同時，在肺*、肝*等**中也發現了FGFR的異常***（圖3）。圖3各類實體瘤中FGFR突變頻率[1]04FGFR抑制劑研究現狀FGFR抑制劑有望成為泛*種靶向***的新選擇，所以FGFR靶點在**領域受關注度極高，目前國內多家藥企布局FGFR靶向療法的研究開發（表2）。表2中國的FGFR抑制劑研發現狀05FGFR抑制劑生物標志物研究FGFR抑制劑獲批和在研藥物，以及相應的臨床試驗生物標志物研究總結如表3。表3FGFR抑制劑及臨床試驗生物標志物[7-9]檢測FGFR基因變異包括融合、重排、擴增和點突變以及其配體的過表達等，涉及DNA、RNA和蛋白質表達等多個生物學層面，檢測方法主要有NGS，qPCR，FISH，IHC以及RNAscope等（表4）。

    降低引物的擴增效率，也需要重新設計并合成引物。3、初次復合擴增時，各個引物在反應體系中的濃度均為μm；之后對引物濃度進行調整，獲得進行pcr擴增時各個引物的**佳濃度。經過上述步驟，獲得引物組合。引物組合由120條引物組成，用于檢測68個基因座。各個基因座的名稱、擴增基因座對應的引物名稱和引物的核苷酸序列依次見表1中第1列、第2列和第3列。進行pcr擴增時各個引物的**佳濃度見表1中第5列。表1各個基因座對應的引物在hg38人類參考基因組(hg38人類基因組的信息見網址./goldenpath/hg38/bigzips/)中的pcr擴增產物的長度和核苷酸序列詳見表2。各個str基因座的pcr擴增產物的長度范圍分布見圖1。表2三、基于二代測序技術檢測68個基因座的試劑盒的制備基于二代測序技術檢測68個基因座的試劑盒包括引物混合物；引物混合物由步驟二制備的120條引物混合而成。實施例2、實施例1制備的試劑盒檢測標準品2800m的str分型及其應用一、實施例1制備的試劑盒檢測標準品2800m的str分型1、dna樣本準備取標準品2800m，用超純水稀釋，獲得濃度為1ng/μl的標準品2800m水溶液。2、pcr擴增以標準品2800m水溶液為模板，采用實施例1步驟三制備的引物混合物進行pcr擴增，得到pcr擴增產物。 邁杰轉化醫學擁有豐富的伴隨診斷開發經驗，高質量的管理體系和高素質的研發團隊。

    第二代測序技術高通量測序技術(High-throughputsequencing,HTS)是對傳統Sanger測序技術**性的變革，可以一次對幾十萬到幾百萬條核酸分子進行序列測定，因此也稱其為下一代測序技術(NextGenerationSequencing,NGS)，高通量測序技術的出現使得對一個物種的轉錄組和基因組進行細致全貌的分析成為可能。技術平臺經過科研人員的不斷開發和改進，目前成熟的第二代測序技術共有3種，分別為Roche公司的454技術、ABI公司的SOLiD技術和Illumina公司的Solexa技術。Roche/454該技術由JonathanRothberg于2005年發明，該技術是***個被發明的二代測序技術，該技術**生命科學的研究進入高通量測序時代。該技術的基本原理是：一個片段=一個磁珠=一條讀長，DN**段無需進行熒光標記，無需電泳，邊合成變測序，堿基在加入到序列中時，會脫掉一個焦磷酸，通過檢測焦磷酸識別堿基，因此也被稱為焦磷酸測序。 邁杰與大學，研究院所，醫院的科研人員進行科研轉化研究合作,包括基礎科學研究及臨床應用研究等。四川Claudin18.2邁杰轉化醫學NGS平臺來電咨詢

邁杰轉化醫學開發的伴隨診斷試劑盒,基因突變檢測試劑盒,檢測范圍全。湖北多靶點邁杰轉化醫學NGS平臺創新服務

    二、一代測序簡介1、發生和發展***代測序技術是Sanger于20世紀70年代中末期發明的雙脫氧鏈終止測序法，手動測序，用同位素標記，Sanger也因此獲得其第2個諾貝爾獎（在Sanger發明雙脫氧鏈終止測序法前WalterGilbert發明化學降解法測定DNA序列）；80年代出現***臺自動化測序設備，熒光標記代替同位素，計算機圖像識別；90年代中期測序儀重大改進，毛細管電泳替代凝膠電泳；2003年完成人類基因組測序工作。2、基本原理以單條DNA鏈為模板合成互補鏈，在DNA復制過程中，合成原料（2’脫氧核苷酸dNTP）中摻入標記過的2’3’ddNTP（雙脫氧鏈終止測序法由此而來），就會產生一系列末端終止的DNA鏈，并能通過電泳按長度分辨。不同末端終止DNA鏈的長度是由摻入到新合成鏈上隨機位置的ddNTP決定的。經PCR擴增反應，可以得到一系列長度不同的產物，由于ddNTP帶有熒光標記，對產物進行電泳分離，并用相應的儀器進行檢測，就可以讀出模板的序列。鏈終止法反應的**仍是PCR法。作者：心平氣和鏈接：源：知乎著作權歸作者所有。商業轉載請聯系作者獲得授權，非商業轉載請注明出處。 湖北多靶點邁杰轉化醫學NGS平臺創新服務