流式細(xì)鹿分析儀如Guava easyCyte" 8HT儀器采用單細(xì)胞的激光激發(fā)和熒光及折射光的后續(xù)檢測，以提供多參數(shù)細(xì)胞分析。 檢測方法 和其它免疫檢測應(yīng)用一樣，有幾種通過流式細(xì)胞術(shù)檢測特異性細(xì)胞的抗體應(yīng)用方法。主要有三種主要方法∶·直接檢測法 直接檢測法是指單獨(dú)一個(gè)步驟的染色過程;它采用的熒光分子直標(biāo)的一抗與目標(biāo)蛋白特異性結(jié)合。 當(dāng)檢測位于細(xì)胞表面的抗原時(shí)，不推薦進(jìn)行經(jīng)奧園定，因?yàn)檫@個(gè)過程可能使抗體無法接觸目標(biāo)抗原。因此，必須進(jìn)行高效工作，以保持未固定細(xì)胞存活，直至完成數(shù)據(jù)獲取。這些直標(biāo)抗體的應(yīng)用加快了染色過程，因?yàn)槟繕?biāo)抗原的結(jié)合和檢測熒光基團(tuán)標(biāo)記在同一個(gè)步驟中完成。Merck抗體上海授權(quán)代理商。上海鑒定抗體抗體商家

問題 可能的原因 處理方法 印跡上出現(xiàn)條紋 在凝膠的蛋白負(fù)荷過量。 準(zhǔn)確測量蛋白濃度，載入較少的蛋白。 印跡有污染或模糊 凝膠平衡不當(dāng)，或在實(shí)驗(yàn)過程中收縮 檢查凝膠平衡時(shí)間。 采用麗春紅S染色時(shí)， 轉(zhuǎn)膜無效 轉(zhuǎn)膜時(shí)，小心除去氣泡。 印跡染色較差 確保在電轉(zhuǎn)過程中因?yàn)闇囟冗^高而產(chǎn)生氣泡或凝膠/膜變形 采用麗春紅S染色時(shí)， 在轉(zhuǎn)膜過程中蛋白沒有轉(zhuǎn)移 檢查設(shè)備（轉(zhuǎn)膜盒、盒蓋、電源）。 印跡沒有染色 檢查在轉(zhuǎn)膜過程中凝膠和膜的順序是 確保膜位于凝膠的右側(cè)。 否正確長寧區(qū)標(biāo)簽抗體抗體益啟生物是Sigma抗體的代理商。

對于探索性研究，Western blotting仍是優(yōu)先平臺，是用于評估新抗體和其它蛋白檢測分析 法（如ELISA、基于微珠的分析法、流式細(xì)胞術(shù)和免疫組織化學(xué)）的標(biāo)準(zhǔn)。新技術(shù)的開發(fā)**減少Western blotting過程需要的時(shí)間（例如默克密理博的 SNAP i.d.? 2.0系統(tǒng)，目錄編 號SNAP2MM），提高了WB實(shí)驗(yàn)的效率。 Western blotting的基本程序涉及下述關(guān)鍵步驟 樣本制備 凝膠電泳 轉(zhuǎn)膜 封閉非特異性結(jié)合 加入抗體 檢測 Western Blot 實(shí)驗(yàn)流程圖 Troubleshooting 問題 可能的原因 處理方法

例如，磷酸特異性抗體可能只與活化的磷酸化蛋白發(fā)生反應(yīng)。如果您的蛋白定位在胞內(nèi)，則必須對細(xì)胞進(jìn)行裂解。流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)可能要選擇識別細(xì)胞表面分子的抗體。如果您的蛋白有三級結(jié)構(gòu)，且掩蓋了抗原表位，則必須對樣本進(jìn)行變性，因?yàn)橛行┛贵w無法識別自然狀態(tài)的蛋白。一些抗體只在冷凍或非固定組織中起效，而有些抗體只對經(jīng)抗原修復(fù)后的石蠟切片起效。 目標(biāo)蛋白的物種來源 比較好選擇明確標(biāo)有目標(biāo)蛋白種屬的抗體。參考抗體說明書或網(wǎng)站信息。上海益啟生物公司科研抗體的優(yōu)勢。

如果目標(biāo)蛋白的種屬不包括在已檢測的種屬中，您可以通過蛋白數(shù)據(jù)庫快速檢查特異性蛋白序列。 抗體種屬來源 一抗的種屬來源在選擇二抗時(shí)有很大的作用。二抗應(yīng)盡量與您的樣本物種相隔較遠(yuǎn)。 在說明書或供應(yīng)商網(wǎng)站上查詢已驗(yàn)證的數(shù)據(jù)： 1、查看說明書或供應(yīng)商網(wǎng)站上的驗(yàn)證數(shù)據(jù)并檢查數(shù)據(jù)質(zhì)量，及驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)方法。 2、查看檢測的樣本為何種類型（細(xì)胞裂解液、組織勻漿=等）。 3、只使用純化重組蛋白得到的結(jié)果可能無法作為細(xì)胞或組織樣本的比較好參考！正規(guī)科研抗體品牌零售代理商家。普陀區(qū)H3抗體抗體商家

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