免疫組化應該選擇石蠟切片還是冰凍切片?
(1)要求做冰凍切片的不一定能做石蠟切片,這是***我向一老師請教得出的結論。因為作石蠟切片時要高溫烤片,可能會破壞組織的抗原性,如果組織的抗原性較穩定,則可作石蠟切片;但是要求做石蠟切片的,可作冰凍切片。
(2)冰凍切片的優點是能夠較好的保存組織的抗原免疫活性,做免疫組化時不需抗原修復這一步。缺點是細胞內易形成冰晶而破壞細胞結構,可能會使抗原彌散;切片厚度較石蠟的厚,做的片子沒石蠟的漂亮。當你買一抗時,目錄上都寫著做什么樣的切片,如果它寫著只能做冰凍,就不能做石蠟,如寫著兩者都可,那就都能做。
(3)石蠟切片的優點可以保持組織細胞的形態結構,且容易存放在室溫,而冰凍切片比較麻煩,一定要存在-80度的低溫冰箱中,尤其是用來做原位雜交的的切片,為了防止RNA降解,保存一貫很重要。由于石蠟切片可以切到4微米左右,所以原位雜交探針容易滲透到組織中去,容易成功,而且得到的顏色/形態都較冰凍切片好。
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免疫組化指的是根據抗體與抗原特異結合的原理來檢測組織切片中的抗原(如蛋白)。immuno的詞根來自操作中所使用的抗體,而histo意味著組織。另一種類似的技術是免疫細胞化學(Immunocytochemistry,簡稱ICC)。這兩個詞大家經?;熘?,看著好像差不多,但實際上還是有點區別。IHCvsICC對于IHC,組織是來自患者或動物,經過冷凍或石蠟包埋。將這些組織制成約4μm厚的切片,封片后再處理。通過這種方法,研究人員可觀察細胞組分的定位,同時維持周圍組織的原先結構。對于ICC,大部分細胞外基質及其他基質組分被去除,只剩下整個細胞來染色。ICC的來源可以是細胞懸液,來自患者或動物(如血涂片、拭子等),或在實驗室中進行的組織培養細胞系。 內蒙古靠譜免疫組化注意事項臨床樣本檢測,免疫組化,英瀚斯生物專業病理。
免疫組化結果要如何分析?
(1)陽性著色細胞計數法。在40*光鏡下,隨機選擇不重疊的10個視野,機器或人工計數陽性著色細胞,每組3~6張不同動物組織切片,然后進行組間比較即可。
(2)灰密度分析法??梢酝ㄟ^在不同組別和不同動物組織切片上選擇相同區域、相同條件下用image j進行灰密度分析,然后進行統計分析即可。
(3)評分法。用光學顯微鏡下對組織切片分別按染色程度(0~3分為陰性著色、淡黃色、淺褐色、深褐色)、陽性范圍進行評分(1~4分為0~25%、26~50%、51~75%、76~100%),**終可以分數相加,再進行比較。對于以上這幾種方法,各有利弊,請細心選擇。要想得到正確結果的前提是你要做出著色均勻、背景很淺的高質量切片。
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免疫組化的顯色系統
免疫組化的顯色系統是將抗原-抗體反應轉化為可見信號的關鍵步驟。常用的免疫組化顯色系統有DAB(3,3'-二氨基聯苯胺)和AEC(3-氨基-9-乙基咔唑)。DAB顯色產生棕色沉淀,適用于光學顯微鏡觀察。AEC顯色產生紅色沉淀,適用于光學顯微鏡觀察,但不適合長期保存。此外,還有熒光顯色系統,如FITC(異硫氰酸熒光素)和TRITC(四甲基羅丹明異硫氰酸酯),適用于熒光顯微鏡觀察。選擇合適的顯色系統需要考慮實驗目的和檢測設備。 免疫組化可以看什么?
免疫組化的局限性,可能會有假陽性。陽性信號定位不正確即為假陽性,包括著色不勻、背景著色、邊緣效應,另外組織的某些特定成分也能導致假陽性結果。假陽性可能的原因有:(1)一抗濃度及一抗是否失效,抗體有一個合適的濃度范圍且必須在有效期內使用,過期的抗體或者不著色,或者背景著色,形成假陽性;(2)試劑未充分覆蓋組織,組織邊緣的試劑易干濃度較組織中間高致深染;(3)抗體孵育時間過長,由于室溫的影響夏季孵育時間稍短,冬季孵育時間稍長;(4)操作過程中組織變干,造成組織邊緣收縮或損壞形成偽影,產生假陽性;(5)3,3'-二氨基聯苯胺(DAB)顯色時間太長,DAB宜現配現用,配制時間比較好在30min以內;(6)由于胞漿里含有較多的蛋白質,因此間質和胞漿中出現很多非特異性的染色,如內源性酶血紅蛋白、肌紅蛋白等造成的著色,可以通過血清封閉解決;乳腺cancer組織中的脂肪細胞、淋巴細胞也會產生非特異性的染色;(7)非特異性抗體吸附常見于壞死組織中,使壞死組織呈較高的背景染色,在免疫組化中應避免選擇壞死組織較多的蠟塊。有沒有做免疫組化比較好的公司?安徽病理免疫組化怎么樣
免疫組化如何得到好的效果?新疆什么是免疫組化哪家好
臨床應用中,藥物靶點免疫組化,英瀚斯生物專業做實驗外包服務,一站式醫學科研平臺。免疫組化及分子病理學方法在疾病診斷中只只起輔助醫療的作用,而藥物病理學是用病理學的方法確定藥物醫療的靶點、評價藥物醫療的療效、預測藥物醫療的反應,因此藥物靶點免疫組化屬“單獨的診斷”。因此對于對照的設置、質量的控制均需要更高的要求,如對試劑的要求,不同于一般的診斷試劑,應按對藥物管理的要求操作。HER2蛋白著色3+者可作為臨床醫生建議患者接受曲妥珠單抗等藥物醫療的依據。新疆什么是免疫組化哪家好