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遼寧anti-HA COIP免疫磁珠市場報價

來源: 發布時間:2022-02-14

免疫磁珠法(MiniMACS)在分離純化外周血CD4+和CD8+T淋巴細胞亞群中的應用.方法:應用密度梯度離心法分離外周血單個核細胞(Peripheralbloodmononucleatecells,PBMC),采用MiniMACS分別分離和純化39例標本外周血PBMC中的CD4+T淋巴細胞和CD8+T淋巴細胞,并經流式細胞儀分析細胞純度和臺盼藍染色的方法對細胞活力進行評估.結果:MiniMACS分離外周血CD4+T淋巴細胞前,后細胞純度分別為(37.38±5.74)%,(97.75±1.03)%(P〈0.001),CD8+T淋巴細胞分離純化前后細胞純度分別為(20.11±6.83)%,(96.85±1.86)%(P〈0.001);外周血分離前PBMC細胞活力為(97.66±2.73)%,純化為CD4+T淋巴細胞和CD8+T淋巴細胞后細胞活力分別為(97.44±3.08)%,(98.05±2.92)%(P〉0.05).結論:MiniMACS可以高度富集CD4+T淋巴細胞和CD8+T淋巴細胞且不改變細胞的活力.BEENbio Anti HA Co-IP&CHIP磁珠 Cell Nature Science。遼寧anti-HA COIP免疫磁珠市場報價

免疫磁珠法分離細胞是基于細胞表面抗原能與連接有磁珠的特異性單抗相結合,在外加磁場中,通過抗體與磁珠相連的細胞被吸附而滯留在磁場中,無該種表面抗原的細胞由于不能與連接著磁珠的特異性單抗結合而沒有磁性,不在磁場中停留,從而使細胞得以分離。免疫磁珠應用分為正選法和負選法:正選法-磁珠結合的細胞就是所要分離獲得的細胞負選法-磁珠結合不需要的細胞,游離于上清液的細胞為所需細胞,一般而言,負選法比正選法的磁珠用量大磁珠:大小在0.1-0.45mm包被了生產的高質量單抗磁珠已為白細胞亞群的分選所優化將包被了特異性單抗的BDIMag磁珠加入細胞懸液,磁珠特異性地與有相應抗原的細胞亞群結合,通過分離得到的連有磁珠的細胞可直接用于功能試驗和用流式細胞儀檢測。北京anti-Myc 免疫共沉淀免疫磁珠生產廠家納米免疫磁珠富集單核增生李斯特菌的研究。

免疫磁珠(Immunomagneticbeads,IMB),是由載體微球和免疫配基結合而成的一種納米級材料.免疫磁珠分離技術是以高均一性的磁性微球為固相支持物,將免疫配基(如抗體,抗原等)通過功能基團結合到磁性載體上形成免疫磁性微球,利用特異性的免疫學反應,在磁力作用下,發生力學移動,從混合溶液中分離出特異性的靶物質.具有分離速度快,效率高,可重復性好,操作簡單,不需要昂貴的儀器設備等優點.本實驗采用化學共沉淀的方法合成了納米級Fe3O4磁性微粒,具有顆粒均一程度高,懸浮穩定性好,超順磁性等特點,經固體物含量的測定及其粒徑的測定,磁珠的濃度約為7.9mg/mL,粒徑約為30~100nm左右,對其懸浮液加入烷基化試劑和醛基化試劑進行表面修飾,提高了磁性微粒的性能.

免疫共沉淀(COIP)實驗過程
(1)轉染后24-48 h 可收獲細胞,加入適量細胞裂解緩沖液(含蛋白酶抑制劑),冰上裂解30min, 細胞裂解液于4°C, 最大轉速離心30 min后取上清;
(2)取少量裂解液以備Western blot分析,剩余裂解液加1μg相應的抗體加入到細胞裂解液,4°C緩慢搖晃孵育過夜;
(3)取10μl protein A 瓊脂糖珠,用適量裂解緩沖液洗3 次,每次3,000 rpm離心3 min;
(4)將預處理過的10μl protein A 瓊脂糖珠加入到和抗體孵育過夜的細胞裂解液中4°C緩慢搖晃孵育2-4h,使抗體與protein A瓊脂糖珠耦聯;
(5)免疫沉淀反應后,在4°C 以3,000 rpm 速度離心3 min,將瓊脂糖珠離心至管底;將上清小心吸去,瓊脂糖珠用1ml裂解緩沖液洗3-4次;***加入15μl的2×SDS 上樣緩沖液,沸水煮5分鐘;
(6)SDS-PAGE, Western blotting或質譜儀分析。
注意的問題:
(1)細胞裂解采用溫和的裂解條件,不能破壞細胞內存在的所有蛋白質-蛋白質相互作用,多采用非離子變性劑(NP40或Triton X-100)。每種細胞的裂解條件是不一樣的,通過經驗確定。不能用高濃度的變性劑(0.2%SDS),細胞裂解液中要加各種酶抑制劑,如商品化的cocktailer。
(2)使用明確的抗體,可以將幾種抗體共同使用。
(3)使用對照抗體:

CD3/CD28免疫磁珠法體外擴增外周血T淋巴細胞。

免疫磁珠細胞分選方法可以在幾分鐘內從復雜的細胞混合物中分離出很高純度的細胞。把細胞用超級順磁性的免疫磁珠特異性地標記,磁性標記完后,把這些細胞通過一個放在強而穩定磁場中的分選柱。分選柱里的基質造成一個高梯度磁場。被磁性標記的細胞滯留在柱里而未被標記的細胞則流出。當分選柱移出磁場后,滯留柱內的磁性標記細胞就可以被洗脫出來,這樣就完全可以獲得標記和未標記的兩個細胞組份。超順磁性的磁珠的體積很小,其直徑約為50nm,體積約小于真核細胞的一百萬份之一,可與病毒的大小相比。標記細胞上的微型磁珠即使在掃描電鏡照片上也幾乎看不到。磁性抗體和磁性標記物間的反應可在幾分鐘內完成。由于微型磁珠的體積極小,所以不會對細胞造成機械性壓力,而且使孵育時間短,操作過程快。免疫磁珠形成一個穩定的膠體液,它們在磁場中既不沉淀又不凝聚。微型磁珠的大小和它的組成成份(氧化鐵和多糖)使其可被生物降解,且不會***細胞或影響細胞的功能和活力,細胞的生理功能也不變。磁珠不需要去除,因此,陽性分選出的細胞(即磁性標記細胞)可立即用于分析和隨后的實驗。外周血微轉移前列腺Cancer細胞的免疫磁珠法檢測。黑龍江COIP免疫磁珠代理價格4折起

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COIP實驗步驟
第三步:免疫共沉淀
根據不同的抗體結合方式,這里的免疫共沉淀步驟會稍有不同,但是本質是一樣的,都是為了形成抗原-蛋白復合物。
如果直接使用 Protein A/G 結合的 beads,先進行細胞裂解液/蛋白混合物與抗體的孵育,再加入 beads 將蛋白-抗體復合物拉下來。
如果使用了交聯劑將抗體與 Protein A/G 固定,或者直接將抗體固定在 beads,則將固定抗體的 beads 與細胞裂解液或則蛋白混合物一起孵育。
增加在洗脫之前的洗滌次數或在免疫共沉淀緩沖液中加入 Triton X-100 ,可以降低非特異性結合,以防止蛋白在陰性對照樹脂實驗樣品中被檢測到。
第四步:洗脫與檢測
***一步則是使用洗脫緩沖液將互作蛋白復合物洗脫,并通過 Western Blot 或者 Mass spectra 檢測鑒定蛋白。當蛋白或抗體對低 pH 的緩沖液敏感,可使用中性 pH 值的洗脫緩沖液。
注意事項:
如后續需進行酶活或功能性分析,則需使用兼容下游檢測的 Elution buffer 進行洗脫。
對于交聯劑結合的 beads,為了保持抗體偶聯樹脂的活性,應立即再生和存儲樹脂,保證抗體可以重復利用。
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