利用免疫磁珠從SD大鼠坐骨神經分離培養獲得大量,高純度雪旺細胞的方法.[方法]選用4-7dSD大鼠,無菌條件下取雙側坐骨神經,解剖鏡下剝離去除神經外膜,獲得神經束,將神經束剪碎至1mm3大小.采用雙酶2次消化法消化,胎牛血清中止消化后,離心并加入DF12培養液培養.7d后應用免疫磁珠法對細胞進行純化培養,培養2d后進行傳代接種.培養過程中對細胞進行形態學觀察,計數及活力測定;MTY法繪制細胞生長曲線,采用免疫細胞化學熒光染色對細胞進行鑒定并且計算所得細胞純度.[結果]分離培養所得細胞即為雪旺細胞;采用免疫磁珠法能對培養所得雪旺細胞進行純化.純化后雪旺細胞活力為96%±0.5%,純度98%±1.1%,培養2d后就可以傳代.[結論]免疫磁珠法可以用于雪旺細胞的純化培養,所得雪旺細胞純度高,活力強,能滿足組織工程人工神經的需要.BEENbio ProteinA/G Co-IP&CHIP磁珠蛋白相互作用。吉林protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠代理價格4折起
常用的磁珠法DNA提取試劑盒,國外的有Dynal、Qiagen等,國內將磁珠應用于核酸提取的研究起源于02年左右,經過近些年的反復試驗,形成了穩定的核酸提取體系,并已被***用于一些疾病(如乙肝、丙肝、結核菌)等的定量檢測(如惠爾納米的系列磁珠法核酸提取試劑盒)。國產磁珠法試劑盒與進口產品相比,已不單單是只具有價格優勢,其產品的穩定性、高效性、提取出的核酸的質量與產量都足以與進口磁珠法試劑盒媲美。但是進口試劑盒長期以來形成的完善的銷售渠道對國產試劑盒的推廣是一大挑戰。陜西COIP免疫磁珠送貨上門應用免疫磁珠分離成人骨髓中STRO-1陽性細胞。
檢測EPCAM、MUC16兩種抗原在上皮性卵巢*循環腫瘤細胞中表達的相關性。方法分別用羧基磁珠制備EPCAM、MUC16兩種免疫磁珠,分3組:EPCAM免疫磁珠檢測組、MUC16免疫磁珠檢測組、2種磁珠均等混合檢測組。對來源于同一患者的等體積外周血樣本進行循環腫瘤細胞檢測,HE染色后鑒定檢測值。結果EPCAM免疫磁珠、MUC16免疫磁珠、EPCAM+MUC16免疫磁珠對同體積、同來源樣本檢測值分別為22±11、14±6、28±12個腫瘤細胞(P0.05),說明檢測效率有統計學差異。結論MUC16與EPCAM在上皮性卵巢*循環腫瘤細胞中**表達且存在差異,因此增加MUC16這一***標志物可有效提高上皮性卵巢*CTCs檢出數量。
COIP常見問題及對策
1:如何提高抗體與磁珠結合效率?
磁珠與抗體的結合效率與抗體的種屬來源及所屬亞型有關,請確 認抗體的類型與 Protein A/G 配基的親和效率。如抗體所屬亞型與 Protein A/G的親和度較低,可以通過增加抗體與磁珠的孵育時間( 30~120min)、提高結合緩沖液的pH值(8~9)及降低離子強度( 25~100mM NaCl)等方法提高親和效率。
2:如何提高磁珠在免疫沉淀反應中的特異性?
可以先將抗體與樣品進行孵育,形成抗體-抗原復合物,再用 Protein A/G磁珠捕獲復合物。這種方法可以提高抗體與抗原的結合效 率,并降低磁珠與樣品接觸的時間,從而提高沉淀產物的特異性。對 于蛋白質/核酸共沉淀或染色質免疫共沉淀也推薦使用此法。 BEENbio Anti Flag Co-IP&CHIP磁珠 蛋白相互作用。
探討小鼠脾臟CD8+T細胞的免疫磁珠負性分選方法,并對分選后所得細胞進行純度、活力及功能檢測.方法以免疫磁珠負性分選法從小鼠脾臟細胞中分離CD8+T細胞,流式細胞術檢測所得細胞的純度,臺盼藍檢測細胞活力并用ConA刺激檢測增殖能力.結果經過流式細胞儀測定免疫磁珠負性分選后的小鼠脾臟CD8+T細胞純度達到(91.6±3.6)%,臺盼蘭染色細胞活力為(94.9±3.2)%,ConA刺激72h后有(56.3±1.7)%的細胞增殖.結論免疫磁珠負性分選法能夠分選出高純度的CD8+T細胞,并且不影響分選靶細胞的細胞活力和功能.密度梯度離心聯合上皮細胞黏附分子免疫磁珠富集法檢測卵巢Cancer循環腫瘤細胞及其與腫瘤復發轉移的相關性.天津anti-HA COIP免疫磁珠市場報價
免疫磁珠技術在tumor學中的應用。吉林protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠代理價格4折起
免疫磁珠法分選人骨髓多能成體祖細胞,觀察其分選效果,建立體外分選純化及培養人骨髓來源多能成體祖細胞(hMAPCs)的方法.方法:取健康成人志愿者適量骨髓后采用梯度密度離心法分離獲取單個核細胞,在自制培養基下貼壁培養后,將獲取的骨髓貼壁細胞通過CD45,血糖蛋白A(GlyA)免疫微磁珠(miniMACS)負分選,錐蟲藍拒染實驗計數MACS分選前后細胞活力.流式細胞儀鑒定分選后細胞純度;流式細胞儀分析培養細胞CD29,CD44,CD34和HLA-DR表達情況.結果:通過MACS分選,平均每1×106/ml骨髓貼壁細胞可分選出約(5~10)×104/mlhMAPCs,分選后的hMAPCs細胞生長良好,**長傳代到第20代.分選前后細胞活力分別為(96.7±1.7)%和(96.0±2.4)%,無明顯差異;流式細胞儀分析獲取的CD45-,GlyA-細胞純度大于98%;流式細胞儀檢測hMAPCs中CD29陽性表達細胞比率為99.2%,CD44陽性細胞比率為98.3%,CD34陽性細胞比率為1.2%,HLA-DR陽性細胞比率為5.3%.結論:CD45,GlyA免疫微磁珠負分選可從骨髓中分離高純度的hMAPCs;分選后hMAPCs在自行研制的培養基中有較強的增殖能力.吉林protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠代理價格4折起
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