免疫磁性細胞分選系統分離純化骨髓衍生肝干細胞亞群c-Kit^+lin^-。方法:實驗于2006—07/08在南方醫科大學實驗動物中心完成。6~8周齡的SPF級純系BALB,C雄性小鼠10只,體質量18~20g。收集小鼠股骨骨髓細胞,利用免疫磁性細胞分選系統,通過兩步法分選純化c-Kit^+lin^-:將獲取的lin^-細胞懸液8℃條件下1500r/min離心10min,棄上清,按80μL/10^7加入Buffer重懸細胞。按20μL/10^7加生物素抗體磁珠,混勻,4℃冰箱孵育15min,按1 mL/10^7加入Buffer洗細胞1次,8℃條件下1500r/min離心10min,棄上清,按500μL/10^8加入Buffer重懸細胞。Buffer 500μL潤MS柱,懸液過柱后,Buffer 500μL/次洗柱3次,柱子脫離磁場,加1mL Buffer,用配套柱塞推出柱中的c-Kit^+lin^-細胞,收集到c-kit^+lin-細胞,細胞計數。取2.0x108個細胞分成10等份,流式細胞儀分析c-Kit^+lin^-細胞純度,計算回收率,評估純化效率,苔盼蘭染色檢測純化前后的細胞活力。計算活細胞的百分率。細胞純度和細胞回收率的計算:細胞純度:分離產物中的陽性細胞數,分離細胞的總細胞數×100%,細胞回收率:分離產物中的陽性細胞數,起始標本陽性細胞總數×100%。上海普平生物科技有限公司專業致力于免疫磁珠銷售。湖南anti-HA COIP免疫磁珠生產廠家
免疫共沉淀（COIP）實驗過程（1）轉染后24-48h可收獲細胞，加入適量細胞裂解緩沖液（含蛋白酶抑制劑），冰上裂解30min,細胞裂解液于4°C，最大轉速離心30min后取上清；（2）取少量裂解液以備Westernblot分析，剩余裂解液加1μg相應的抗體加入到細胞裂解液，4°C緩慢搖晃孵育過夜；（3）取10μlproteinA瓊脂糖珠，用適量裂解緩沖液洗3次，每次3,000rpm離心3min；（4）將預處理過的10μlproteinA瓊脂糖珠加入到和抗體孵育過夜的細胞裂解液中4°C緩慢搖晃孵育2-4h，使抗體與proteinA瓊脂糖珠耦聯；（5）免疫沉淀反應后，在4°C以3,000rpm速度離心3min，將瓊脂糖珠離心至管底；將上清小心吸去，瓊脂糖珠用1ml裂解緩沖液洗3－4次；***加入15μl的2×SDS上樣緩沖液，沸水煮5分鐘；（6）SDS-PAGE,Westernblotting或質譜儀分析。注意的問題：（1）細胞裂解采用溫和的裂解條件，不能破壞細胞內存在的所有蛋白質－蛋白質相互作用，多采用非離子變性劑（NP40或TritonX-100)。每種細胞的裂解條件是不一樣的，通過經驗確定。不能用高濃度的變性劑（0.2%SDS)，細胞裂解液中要加各種酶抑制劑，如商品化的cocktailer。（2）使用明確的抗體，可以將幾種抗體共同使用。（3）使用對照抗體：遼寧anti-HA 免疫共沉淀免疫磁珠生產廠家BEENbio Anti Myc Co-IP&CHIP磁珠廠家直銷。
小鼠脾臟CD8+T細胞的免疫磁珠負性分選方法,并對分選后所得細胞進行純度、活力及功能檢測.方法以免疫磁珠負性分選法從小鼠脾臟細胞中分離CD8+T細胞,流式細胞術檢測所得細胞的純度,臺盼藍檢測細胞活力并用ConA刺激檢測增殖能力.結果經過流式細胞儀測定免疫磁珠負性分選后的小鼠脾臟CD8+T細胞純度達到(91.6±3.6)%,臺盼蘭染色細胞活力為(94.9±3.2)%,ConA刺激72h后有(56.3±1.7)%的細胞增殖.結論免疫磁珠負性分選法能夠分選出高純度的CD8+T細胞,并且不影響分選靶細胞的細胞活力和功能.
免疫共沉淀（COIP）優點（1）相互作用的蛋白質都是經翻譯后修飾的，處于天然狀態；（2）蛋白的相互作用是在自然狀態下進行的，可以避免人為的影響；（3）可以分離得到天然狀態的相互作用蛋白復合物。免疫共沉淀（COIP）缺點（1）可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質－蛋白質相互作用；（2）兩種蛋白質的結合可能不是直接結合，而可能有第三者在中間起橋梁作用；（3）必須在實驗前預測目的蛋白是什么，以選擇***檢測的抗體，所以，若預測不正確，實驗就得不到結果，方法本身具有冒險性。（4）靈敏度沒有親和色譜高。免疫磁珠的優勢您了解多少呢？
常用的磁珠法DNA提取試劑盒，國外的有Dynal、Qiagen等，國內將磁珠應用于核酸提取的研究起源于02年左右，經過近些年的反復試驗，形成了穩定的核酸提取體系，并已被***用于一些疾病（如乙肝、丙肝、結核菌）等的定量檢測（如惠爾納米的系列磁珠法核酸提取試劑盒）。國產磁珠法試劑盒與進口產品相比，已不單單是只具有價格優勢，其產品的穩定性、高效性、提取出的核酸的質量與產量都足以與進口磁珠法試劑盒媲美。但是進口試劑盒長期以來形成的完善的銷售渠道對國產試劑盒的推廣是一大挑戰。免疫磁珠多種系列供您選擇。吉林anti-Flag 免疫共沉淀免疫磁珠生產廠家
免疫磁珠的各種系列應用領域還是不一樣的。湖南anti-HA COIP免疫磁珠生產廠家
免疫磁珠法(MiniMACS)在分離純化外周血CD4+和CD8+T淋巴細胞亞群中的應用.方法:應用密度梯度離心法分離外周血單個核細胞(Peripheralbloodmononucleatecells,PBMC),采用MiniMACS分別分離和純化39例標本外周血PBMC中的CD4+T淋巴細胞和CD8+T淋巴細胞,并經流式細胞儀分析細胞純度和臺盼藍染色的方法對細胞活力進行評估.結果:MiniMACS分離外周血CD4+T淋巴細胞前,后細胞純度分別為(37.38±5.74)%,(97.75±1.03)%(P〈0.001),CD8+T淋巴細胞分離純化前后細胞純度分別為(20.11±6.83)%,(96.85±1.86)%(P〈0.001);外周血分離前PBMC細胞活力為(97.66±2.73)%,純化為CD4+T淋巴細胞和CD8+T淋巴細胞后細胞活力分別為(97.44±3.08)%,(98.05±2.92)%(P〉0.05).結論:MiniMACS可以高度富集CD4+T淋巴細胞和CD8+T淋巴細胞且不改變細胞的活力.湖南anti-HA COIP免疫磁珠生產廠家
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