CHO細胞即:中國倉鼠卵巢細胞(Chinese Hamster Ovary),它是基因工程疫苗研究中具有代表性的哺乳動物表達載體,是用來表達外源蛋白多也是成功的一類細胞。市場上超過70%的蛋白質藥物選擇的制造細胞就是CHO細胞。CHO細胞可以在外源表達的蛋白質上摻入復雜的聚糖,如N-連接聚糖。有助于蛋白質的折疊和細胞內運輸。重組蛋白表達側重于大化每個分子中含有唾液酸的復雜聚糖的數量,CHO細胞糖基化之后,能增加對蛋白水解的抵抗力和延長體內血清半衰期,所以CHO細胞成為用作重組蛋白的哺乳動物細胞系。重組蛋白疫苗有著天然的優勢。人IL-1重組蛋白定制
在昆蟲細胞表達系統中,昆蟲細胞需要桿狀病毒作為重組蛋白表達的中間體。桿狀病毒是一組不同的DNA病毒,能夠侵染各種昆蟲細胞。它們就像一個穿梭機,將目標基因導入給定的宿主細胞。加州親筆多核多角體病毒(AcMNPV) 在利用桿狀病毒這方面表現出突出的特征。簡單地說,將編碼感興趣蛋白質的基因插入一個主要載體,然后將其克隆到一個名為Bacmid的次要載體上。Bacmid被轉移到一株細菌(通常是大腸桿菌)中進行初步病毒生產和組裝,以獲得一代桿狀病毒(P1)。P1病毒在昆蟲細胞中被擴增(例如sf9)以獲得合適的滴度(P2),然后P2病毒被用于侵染相同或不同的昆蟲細胞系(例如High-five)以實現重組蛋白表達。GMP級IL-9重組蛋白重組蛋白生物科研試劑總體市場逐年遞增。
重組蛋白是由操縱的基因——重組基因編碼的蛋白質,由特定的重組表達系統產生(見蛋白表達系統)。重組基因是一種新的基因組合,由一個或多個DNA的片段或基因從不同的分子或其他物種插入。與天然蛋白相比,重組蛋白產量大,生產相對容易。重組蛋白在研究細胞因子和生長因子、酶和激酶研究以及補體系統功能等生物學過程中發揮著重要作用。此外,重組蛋白被認為是一種高效的藥物,不會產生脫靶的副作用,比小分子的開發時間更短(見重組蛋白藥物)。
不同表達系統所生成的重組蛋白間有何主要區別?以賽默飛為例,Thermo Fisher Scientific? 所提供的重組蛋白產品通常在大腸桿菌,昆蟲細胞或哺乳動物細胞等不同的表達系統中產生。不同表達系統之間產生的重組蛋白的主要差別在于這些蛋白所攜帶的翻譯后修飾,如糖基化修飾。在大腸桿菌中生成的重組蛋白未經糖基化。在昆蟲細胞中產生的重組蛋白通常經有部分糖基化,但不含半乳糖和唾液脫鹽酸,糖鏈也無復雜分支。在哺乳動物細胞中生成的重組蛋白會發生附帶完全的糖基化修飾。備注:Mimic? Sf9 昆蟲細胞(來源于sf9昆蟲細胞系,經改造可穩定表達多種哺乳動物糖基轉移酶)可產生用于表達帶末端唾液酸和半乳糖的復雜的N-糖鏈。重組蛋白的應用顯著增長,用于重組蛋白表達和純化的技術和產品也得以增長。
功能性ELISA是一類以ELISA形式進行的、基于體外配體結合的分析法。該方法用于檢測目的蛋白與其天然結合物配體之間(如生長因子與其受體)的結合能力。如果在該檢測中生長因子能夠與其天然受體相結合,則該生長因子很可能是具有功能的。ED50為OD值讀取過程中能夠提供50%信號強度的生長因子濃度(在包被了受體的平板上)。重組蛋白使用了基于細胞的檢測分析或功能性ELISA分析對其生物學活性進行了檢測,產品頁上會提供相應的ED50值。也有些重組蛋白沒有提供生物活性數據。在大多數情況下,這表明沒有進行生物活性測試,但它并不一定意味著蛋白是沒有活性的。在沒有生物活性數據的情況下,這些蛋白可用做蛋白質分子量標準,蛋白免疫印記陽性對照(如果是全長的重組蛋白)或免疫原。其它可能的用途是配體結合試驗或ELISA的標準品。多肽類激素藥是重組蛋白藥物中的明星產品。義翹神州IL-7重組蛋白
中國的重組蛋白藥物市場,前景廣闊。人IL-1重組蛋白定制
常見的重組蛋白藥物:生長因子viii,幫助血友病患者形成血塊;非格司汀和sargramostim(造血骨髓因子),促進放療或移植后白細胞計數;胰島素,用于糖尿病;IGF1,用于某些生長問題;干擾素(阿爾法),用于乙型和丙型肝炎、生殖器疣、某些白血病和其他疾病;干擾素(β),用于多發性硬化癥;干擾素(伽瑪),用于慢性肉芽腫病;白細胞介素-2,殺死病變細胞;生長因子,用于生長因子缺乏癥;組織纖溶酶原actin劑(t-PA),溶解血凝塊,預防心臟病發作,減輕其嚴重程度。人IL-1重組蛋白定制
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