基因和RNAi***在臨床上的應用需要安全高效的載體。迄今為止,核酸***的兩種主要方法是基于病毒和非病毒載體。與病毒載體相關的安全問題有很多:誘導免疫反應的風險、不必要的突變和**。因此,在開發基于脂質或聚合載體的非病毒載體是勢在必行的。1965年,Vaheri和Pagano引入了二乙基氨基乙基修飾的葡聚糖,這是第一種用于基因傳遞的聚合物。1987年,Felgner引入了DOTMA,這是第一種用于DNA轉染的陽離子脂質。從那時起,大量不同的脂質和聚合物被開發出來。南京星葉生物正是利用將核酸封裝在納米級脂質體囊泡中的技術,開發出了Gemate系列轉染試劑。但似乎找到一種既能改善基因表達又不影響細胞、不對細胞造成損害的技術也至關重要。貴州南京轉染試劑
陽離子脂質體合成中常用的分子是中性脂質二油基磷脂酰乙醇胺(DOPE)。DOPE的作用是促進膜融合,并有助于質膜或核內體的不穩定。此外,由于陽離子脂質相互排斥,因此需要DOPE等輔助脂質來穩定陽離子脂質體(CLs)懸浮液,并抵消其他載體如聚乙烯亞胺(PEI)和樹狀大分子中存在的陰離子糖胺聚糖的抗轉染作用。沒有中性脂質的脂質體具有較低的轉染率,盡管情況并非總是如此。不同的轉染率可能是由用于配制脂質體的陽離子:中性脂質的不同比例引起的。如上所述,CLs介導的核酸轉移的成功取決于許多因素,這些因素可能解釋了脂質體(脂質體介導的轉染)的內在變異性,特別是在體內。湖南轉染試劑價格deae-葡聚糖是一種化學修飾的葡聚糖類似物。
轉染是將外源核酸送入細胞的過程,其目的是使外源基因編碼的蛋白能夠在細胞中表達。這些編碼序列通常由質粒DNA攜帶到細胞中,以研究其未知的功能或用于特定的***目的。此外,降低基因表達的siRNA也是核酸轉染的靶標。通過siRNA的敲低作用,研究人員可以操縱愈合基因的表達來研究基因的功能和相互作用。siRNA在**研究、基因***、組織工程等方面發揮著重要作用。mRNA曾被認為不適合用于基因***藥物,因為它易于降解。然而,研究人員通過化學修飾提高了其穩定性,使其成為表達外源基因的理想核酸藥物。mRNA疫苗已用于預防COVID-19,許多用于*****的mRNA藥物正在開發中。裸核酸分子被細胞吸收的效率極低。這是因為核酸是親水、帶負電的生物分子,難以接近疏水、帶負電的脂質細胞膜。因此,核酸分子必須通過載體傳遞到細胞中。核酸載體有兩種:病毒載體和非病毒載體。在轉染有效性和包裝能力方面,病毒載體表現良好。然而,病毒載體的缺點也不容忽視,比如容易引發炎癥反應和基因突變。而非病毒載體的材料來源豐富,化學結構可控,易于大量制備;因此,它們在核酸轉染中具有不可替代的作用。
為了在體外和體內可重復地傳遞基因和siRNA,含有核酸的脂質體、脂叢和多叢的配方需要精確組成轉染試劑。雖然有幾項研究已經調查了血液成分如何使脂質和聚合物納米顆粒不穩定,對于介導細胞中基因傳遞或沉默的傳遞系統的**終組成知之甚少。多叢和脂叢的組成在系統給藥進入血液后會發生不斷的變化。過多的聚合物鏈或脂質體成分不強烈附著于復合物將從顆粒中脫落,而新的成分,如脂蛋白,可以粘附在復合物的表面。這不僅會導致顆粒的不穩定,還會改變生物分布或促進體內***。了解在體內遞送的每個階段(在給藥部位,在血液循環過程中,在***和組織的細胞外基質中,以及**終進入靶細胞時),多聚物和脂聚物的組成如何變化,可能有助于設計具有更高穩定性的合成載體系統。研究人員集中研究了將合成t細胞免疫原作為DNA疫苗使用的方法。
deae-葡聚糖是一種化學修飾的葡聚糖類似物。通過用二乙基氨基乙基修飾,右旋糖酐鏈的酰胺化很容易被質子化,這使得它可以自組裝成帶負電荷核酸的納米顆粒。deae -葡聚糖是***個用于核酸轉染的陽離子聚合物。早在20世紀50年代,它就極大地增強了脊髓灰質炎病毒和SV40病毒DNA在哺乳動物細胞中的轉染。隨后,deae -葡聚糖被廣泛應用于RNA或DNA的轉染。然而,由于以下原因,deae -葡聚糖并沒有作為比較好候選物:轉染效率遠低于脂質體等其他試劑;deae -葡聚糖的細胞毒性和免疫原性不容忽視。轉染時推薦使用血清減少或無血清培養基包括陽離子轉染試劑,如Lipofectamine、HiperFect 和EndofectinMax。DOTAP 轉染試劑動物實驗
用二乙基氨基乙基修飾,右旋糖酐鏈的酰胺化很容易被質子化,這使得它可以自組裝成帶負電荷核酸的納米顆粒。貴州南京轉染試劑
**近的研究已經確定了陽離子脂質體(CLs)的某些特征,這些特征增強了它們在體內轉運核酸的能力。這些特征包括陽離子頭基團及其鄰近的脂肪鏈在主鏈上呈1,2關系,醚鍵用于橋接脂肪鏈到主鏈,成對的油基鏈作為疏水系鏈。無論如何,這些特征雖然不能決定細胞培養中更好的轉染能力,但可以在體內實現更好的核酸遞送。因此,必須謹慎對待體外和細胞培養的結果,不能必然地用來推斷核酸載體在體內的潛力。當這些囊泡在體內引入時,其他因素(如顆粒直徑)變得更加重要。使用脂質體時遇到的毒性通常與制劑中陽離子脂質與核酸之間的電荷比、所使用的制劑類型以及所給脂質體的劑量密切相關。較高的電荷比通常對多種細胞類型的毒性更大,包括*細胞系。另外,不同的試劑對細胞的毒性程度不同,毒性是細胞特異性的。目前市面上有超過30種不同的商用CL制劑品種可供選擇。由于毒性,脂質體的體內遞送必須盡可能靠近目標部位,以盡量減少副作用。貴州南京轉染試劑