siRNA脂質體

RNA干擾(RNAi)途徑允許siRNA和miRNAs負向調節蛋白表達。siRNA是21～23對核苷酸組成的雙鏈RNA，可誘導同源靶mRNA沉默。為了發揮作用，雙鏈siRNA分裂成兩個單鏈RNA:乘客鏈和引導鏈。乘客鏈被argonaute-2蛋白降解,而引導鏈則被納入RNAi誘導的沉默復合體中，該復合體結合與引導鏈互補的mRNA并將其切割。siRNA似乎具有***多種疾病的巨大潛力，因為它們可以很容易地下調各種靶mRNA，而不考慮它們的位置(即在細胞核或細胞質中)，并且它們的特異性結合表明它們比傳統化學藥物誘導的副作用更少。作為一種新型的基于核酸的***策略，siRNA***與傳統的化學藥物相比具有許多優勢。然而，為了促進基于siRNA的***方法的發展，必須克服一些挑戰，包括需要識別適當的靶基因和開發優化的遞送系統。許多研究人員試圖利用陽離子脂質體提高siRNA的細胞遞送和基因沉默效率。例如，由DC-6-14、DOPE和膽固醇組成的陽離子脂質體被用于遞送螢火蟲熒光素酶特異性的siRNA。當陽離子脂質體與siRNA持續劇烈攪拌混合時，轉染效率提高，說明將siRNA加載到陽離子脂質體上的方法可以調節轉染效率。siRNA脂叢的***應用因靶蛋白而異。 Zeta電位被認為是影響細胞攝取和藥物傳遞的重要因素之一。中國香港脂質體載藥技術服務公司

載藥脂質體如何純化如果需要純化載藥脂質體，通常會根據載藥脂質體的性質和所需純度要求選擇合適的純化方法。以下是一些可能的純化方法：1.超濾法：超濾可以用于去除較大的雜質和未包埋的藥物。通過選擇適當的分子量截止膜，將載藥脂質體溶液經過超濾膜，較大的雜質和未包埋的藥物將被截留，而較小的載藥脂質體顆粒則通過膜孔。2.凝膠過濾法：凝膠過濾可以利用凝膠材料的孔隙大小分離分子。將載藥脂質體溶液加入到凝膠柱中，通過洗脫的方式，較小的載藥脂質體顆粒會通過凝膠柱，而較大的雜質則會被截留在柱中。3.離心法：離心可以將載藥脂質體顆粒沉淀到底部，去除上清液中的雜質和未包埋的藥物。將載藥脂質體溶液進行高速離心，使載藥脂質體顆粒沉淀到離心管底部，然后去除上清液中的雜質和未包埋的藥物。4.柱層析法：柱層析可以利用吸附劑對溶液中分子的親和性分離。將載藥脂質體溶液通過填充有吸附劑的柱子，通過洗脫的方式，使載藥脂質體顆粒和雜質分離出來。5.其他方法：根據具體情況，還可以考慮其他純化方法，如凝膠電泳法等。選擇合適的純化方法需要考慮載藥脂質體的性質、所需純度要求以及純化效率等因素。通常會結合多種方法進行純化，以達到所需的純度和純凈度。制備脂質體載藥氣泡脂質體制備方法：原位制備脂質體。

脂質體的載藥率脂質體的載藥率是指單位質量的脂質體所能承載的藥物量。它是評估脂質體藥物傳遞效果的重要指標之一，通常通過藥物在脂質體中的含量或釋放速率來表征。脂質體的載藥率受多種因素影響，包括脂質體的組成、結構、制備方法以及藥物本身的性質。以下是影響脂質體載藥率的一些關鍵因素：1.脂質體組成：脂質體的組成對其載藥率有重要影響。磷脂質的類型和含量、膽固醇的含量、表面活性劑的種類等都會影響脂質體的藥物承載能力。2.藥物的性質：藥物的溶解度、分配系數、分子大小等性質會影響其在脂質體中的溶解和擴散，進而影響載藥率。3.載***法：載***法的選擇會影響到藥物與脂質體之間的相互作用和藥物的分布。常見的載***法包括共混法、溶劑溶解法、膜溶解法等。

脂質體配方中脂類的毒性由于LNPs主要由天然脂質組成，它們被認為是無藥理活性和毒性**小的。然而，在某些情況下，LNP并非免疫惰性，而LNP成分是可能對人體細胞有毒的非天然化合物。例如，雖然陽離子脂質作為遞送脆弱化合物(如核酸)的載體提供了巨大的希望，但一些陽離子脂質會引起細胞毒性。在某些情況下，陽離子脂質會減少細胞中的有絲分裂，在細胞的細胞質中形成液泡，并對關鍵的細胞蛋白如蛋白激酶c造成有害影響陽離子脂質的細胞毒性取決于它們的結構親水頭基團;具有季銨頭基的兩親化合物比具有叔胺頭基的兩親化合物毒性更大。疏水鏈對脂質毒性的影響還沒有得到很好的研究，阻礙了低毒性脂質的設計。脂質分子的疏水部分強烈調節其相行為及其對LNP的有用性，但某些脂質相的存在也與膜損傷和細胞毒性有關。PEG-脂質偶聯物也可能引起意想不到的毒性，而已知含有PEG-脂質偶聯物的LNPs與免疫細胞相互作用，產生針對某些聚乙二醇化脂質的不想要的抗體。脂質與生物活性小分子(如葉酸)的結合已被研究用于靶向遞送核酸。

為了***免疫性疾病，將針對甘油醛3-磷酸脫氫酶(***DH)的siRNA與含1,2-dilinoleyl-4-(2-dimethylaminoethyl)-[1,3]-dioxolane、DSPC和膽固醇的陽離子脂質體絡合。用該復合物(5mg/kgsiRNA)處理小鼠，4天后，腹腔巨噬細胞和樹突狀細胞的***DH表達量減少40%，脾源性抗原呈遞細胞的***DH表達量減少60%。在其他研究中，將重鏈鐵蛋白特異性siRNA與陽離子脂質體結合，并局部給藥于荷U251細胞的人膠質瘤小鼠。**內注射鐵蛋白特異性siRNA與DC-Chol和DOPE組成的陽離子脂質體復合物，其抑制**生長的程度與卡莫司定(一種主要用于膠質瘤***的DNA烷基化劑)相當。argonaute-2特異性siRNA已被證明可誘導細胞凋亡，使用由DC-6-14、DSPC、DOPE和DSPC-PEG2000組成陽離子脂質體遞送argonaute-2特異性siRNA時發現，將這些復合物靜脈注射到接種Lewis肺*的小鼠體內(每隔一天1mg/kg，共5次)，這些復合物可降低**組織中argonaute-2的表達，并***抑制**生長。一種含有DOPE的脂質制劑被發現可以增加各種細胞類型中GFP特異性siRNA的攝取。制備脂質體載藥氣泡

由于在巨噬細胞上發現了甘露糖受體， 因此甘露糖已被用于修飾陽離子脂質體以靶向巨噬細胞遞送。中國香港脂質體載藥技術服務公司

商業脂質體產品，包括Visudyne和AmBisome，使?這種?法制造。MLV懸浮液在?壓下通過?個狹窄的間隙，通過剪切?、湍流和速度梯度產?的流體空化?被分解，然后重新排列成更?的脂質體。顆粒??和粒度分布由均質過程的參數決定，如壓?、處理周期、閥?和沖擊設計、流速等;它們還受到樣品性質的影響，包括散裝介質的組成和粘度以及顆粒的初始尺?分布。不斷增加的壓?和處理循環會降低顆粒尺?和多分散性指數(PDI)，但也會導致封裝效率降低。中國香港脂質體載藥技術服務公司