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江蘇多重PCR技術甲基化重測序報告

來源: 發布時間:2021-10-23

DNA甲基化是指生物體在DNA甲基轉移酶(DNA methyltransferase,DMT) 的催化下,以s-腺苷甲硫氨酸(SAM)為甲基供體,將甲基轉移到特定的堿基上的過程。DNA甲基化能降低某些基因的表達活性,去甲基化則能引起基因的重新活化和表達。DNA甲基化能引起染色質的結構、DNA構象、DNA穩定性及DNA與蛋白質之間的相互作用方式的改變,從而影響基因表達。研究證實,CpG二核苷酸中胞嘧啶的甲基化導致了人體1/3以上由于堿基變異而引起的遺傳性疾病。由于DNA甲基化與人體發育和tumour疾病的密切關系,特別是CpG島甲基化引起的抑cancer基因的轉錄失活,使得DNA甲基化成為表觀遺傳學和表觀基因組學的重要研究內容。翼和生物目標區域甲基化項目結合亞硫酸鹽轉化和多重PCR擴增建庫測序技術,對目標區域甲基化位點進行分析。江蘇多重PCR技術甲基化重測序報告

DNA甲基化是表觀遺傳調控的常見機制。啟動子區域的高度甲基化可導致基因表達改變。甲基化多發生于胞嘧啶(cytosine, C)位置。在細胞和組織分化、疾病發生以及適應環境等過程中,甲基化狀態可發生改變。高精確度全基因組甲基化修飾狀態的分析,將為發育、育種、tumour標志物鑒定或藥物靶標尋找等研究奠定基礎。全基因組甲基化測序結合了亞硫酸氫鹽轉化(bisulfite conversion)方法與新一代高通量測序技術,可在單堿基分辨率水平上高效地檢測全基因組DNA甲基化狀態。亞硫酸氫鹽處理可以使DNA中未發生甲基化的胞嘧啶脫氨基轉變成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶保持不變,PCR擴增所需片段,則尿嘧啶全部轉化成胸腺嘧啶。對PCR產物進行高通量測序,與參考序列比對,即可判斷CpG/CHG/CHH位點是否發生甲基化。浙江多重PCR技術甲基化重測序技術服務DNA甲基化在DNA復制起始、錯配修復以及轉座子的失活等過程中對維持遺傳信息的穩定性發揮著重要的作用。

真核生物基因表達受多種機制、多層面的綜合調控。基因的DNA序列不發生改變的情況下,基因的表達水平與功能發生改變,并可遺傳現象,稱為表觀遺傳(epigenetic)現象。DNA甲基化是指在甲基轉移酶的催化下,DNA的CG二核苷酸中的胞嘧啶被選擇性的添加甲基,形成5-甲基胞嘧啶,常見于基因的5′—CG—3′序列。DNA甲基化的位置主要集中在基因5′端的非編碼區,DNA高度甲基化首先會影響DNA結構,進而阻遏基因轉錄,引起基因沉默。人體內,DNA甲基轉移酶主要有四種:DNMT1、DNMT3A、DNMT3B和DNMT3L。在DNA復制完成后,DNMT1是催化甲基轉移至新合成的DNA鏈上,這一現象稱為維持甲基化;DNMT3A和DNMT3B負責催化核酸鏈上新的甲基化位點發生反應,成為形成甲基化;DNMT3L不具有甲級轉移酶活性,其主要作用是調節其他甲基轉移酶的活性。真核細胞內甲基化狀態有3種:持續的低甲基化狀態(如持家基因的甲基化)、誘導的去甲基化狀態(如一些發育階段特異性基因的修飾)和高度甲基化狀態(如人類女性細胞內縊縮-失活的X染色體的甲基化)。

DNA甲基化能引起染色質結構、DNA構象、DNA穩定性及DNA與蛋白質相互作用方式的改變,從而控制基因+表達。在甲基轉移酶的催化下,DNA的CG兩個核苷酸的胞嘧啶被選擇性地添加甲基,形成5-甲基胞嘧啶,這常見于基因的5'-CG-3'序列。大多數脊椎動物基因組DNA都有少量的甲基化胞嘧啶,主要集中在基因5’端的非編碼區,并成簇存在。甲基化位點可隨DNA的復制而遺傳,因為DNA復制后,甲基化酶可將新合成的未甲基化的位點進行甲基化。DNA的甲基化可引起基因的失活。異常的DNA甲基化可參與調控疾病相關的分子信號通路,從而影響其正常功能。

物種的DNA甲基化率通常與物種基因組大小成正比。從細菌的數千個基因進化到高等動物的數萬個基因,基因數增長的一個數量級。要管好這么多的基因,在漫長的一生中有規律地關閉或打開基因表達,DNA甲基化這個開關對高等動植物必不可少。轉座子是一類在基因組上可以自主復制(或剪切)和移動的**功能元件。如果它們隨意移動,對基因組的穩定性具有破壞作用。DNA甲基化對轉座子的移動具有抑制作用。通常,物種的基因組越大,其基因組中轉座子的比例越高,那么限制轉座子移動的門神——DNA甲基化的比例就越高。在基因組的某些區域中,通常位于基因的啟動子區,CpG 序列密度很高,可以達均值的5 倍以上。杭州bisulfite甲基化重測序技術服務

DNA甲基化是基因組DNA的一種主要表觀遺傳修飾形式。江蘇多重PCR技術甲基化重測序報告

DNA甲基化是表觀遺傳學的重要內容。DNA甲基化是基因組DNA的一種主要表觀遺傳修飾形式。DNA甲基化修飾對于維持正常細胞功能、傳遞基因組遺傳印記、胚胎發育以及人類tumour發生,起著至關重要的作用。甲基化研究成為表觀遺傳學的熱點,相應的技術也是層出不窮,根據實驗目的的不同,這些技術大體能夠分成兩類:全基因組甲基化檢測技術以及特異性位點甲基化檢測技術。翼和特色內容目標區域甲基化測序自主知識產權超高重PCR為基礎,目標甲基化區段特異性捕獲,更具針對性,經濟型基于二代測序,可以獲得目標區域內所有C的甲基化數據~500X的測序深度,精確計算每個位點C的甲基化程度通量高,可同時對成百上千個區域進行甲基化程度分析適用于大樣本多區域的DNA甲基化水平檢測Q30>80%檢出率90%以上,90%以上測序片段測序深度>10X。江蘇多重PCR技術甲基化重測序報告

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