DNA甲基化是表觀遺傳學(xué)領(lǐng)域研究的重點(diǎn)之一。DNA甲基化是指在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNA methyltransferase, 縮寫DNMT）的作用下，基因組DNA序列上CpG島的二核苷酸5′端胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?′甲基胞嘧啶（5′ methylcytosine, 縮寫5mC）。這種DNA修飾的方式并未改變基因的序列, 但能改變某些基因的表達(dá)，從而影響生物學(xué)功能。DNA 甲基化參與眾多的細(xì)胞生命活動，包括細(xì)胞分化、組織特異性基因表達(dá)、基因組印記、X 染色體失活等。異常的 DNA 甲基化會導(dǎo)致發(fā)育異常、tumour等疾病的發(fā)生。甲基化的金標(biāo)準(zhǔn)是亞硫酸氫鹽測序法.目標(biāo)區(qū)間甲基化重測序哪里好

WGBS（Whole Genome Bisulfite Sequence）全基因組甲基化測序，利用重亞硫酸氫鹽使DNA中未發(fā)生甲基化的胞嘧啶(C)脫氨基轉(zhuǎn)變成尿嘧啶(U)，而甲基化的胞嘧啶保持不變，然后通過PCR將U變?yōu)锳，*有甲基化的C可以成功保留，***通過測序就可判斷CpG位點(diǎn)是否發(fā)生甲基化。特點(diǎn)是精確度高、重復(fù)性好，檢測范圍廣，可以覆蓋全基因組范圍內(nèi)的每一個C堿基的甲基化狀態(tài)；但需要的數(shù)據(jù)量比較大，成本較高。上海翼和生物是上海市遺傳學(xué)會理事單位，上海市****，至今已有16年的歷史。北京全基因組甲基化重測序哪里好5甲基胞嘧啶 (5-methylcytosine, 5mC)是一種常見的DNA修飾類型，能調(diào)節(jié)基因表達(dá)、轉(zhuǎn)座子及染色體的狀態(tài)等。

亞硫酸氫鈉轉(zhuǎn)化是分析胞嘧啶甲基化效果比較好的工具之一。該方法基于亞硫酸氫鈉對 DNA 的處理，確定其甲基化模式。重亞硫酸鹽測序本質(zhì)上就是重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化與二代測序（NGS）的結(jié)合。甲基化的金標(biāo)準(zhǔn)是亞硫酸氫鹽測序法：用亞硫酸氫鹽處理DNA，未發(fā)生甲基化的胞嘧啶能夠被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶則保持不變，通過后續(xù)的測序即可檢測。利用亞硫酸氫鹽的這種原理，可以衍生出多種甲基化檢測方法，如甲基化特異性的PCR和高分辨率熔解曲線法。

上海翼和生物甲基化測序采用的是重亞硫酸鹽擴(kuò)增子測序法（Bisulfite Amplicon Sequencing， BSAS），重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化是研究DNA甲基化的金標(biāo)方法，該技術(shù)基于非甲基化胞嘧啶（C）向尿嘧啶（U）的化學(xué)轉(zhuǎn)化，即用重亞硫酸鹽處理基因組DNA，非甲基化胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而甲基化胞嘧啶不發(fā)生這種轉(zhuǎn)化，從而能夠在單核苷酸水平上確定DNA甲基化（圖1）。轉(zhuǎn)化后的序列可以進(jìn)行多種分析，包括重亞硫酸鹽測序、焦磷酸測序、甲基化特異性PCR、高分辨率熔解曲線分析、基于微陣列的方法和下一代測序。Hi-Methylseq方案一次測序反應(yīng)每個位點(diǎn)測序上百次節(jié)約時間、成本、定量準(zhǔn)確。

表觀遺傳學(xué)研究已經(jīng)證實(shí)了特定基因區(qū)域的DNA甲基化修飾對于染色體構(gòu)象、基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制有著重要影響，而全基因組DNA甲基化研究將是表觀基因組學(xué)為關(guān)注的內(nèi)容之一。Bisulfite處理能夠?qū)⒒蚪M中未發(fā)生甲基化的C堿基轉(zhuǎn)換成U，進(jìn)行PCR擴(kuò)增后變成T，與原本具有甲基化修飾的C堿基區(qū)分開來，再結(jié)合高通量測序技術(shù)，可繪制單堿基分辨率的全基因組DNA甲基化圖譜。特定物種的高精確度甲基化修飾模式的分析，必將在表觀基因組學(xué)研究中具有里程碑式的意義，并且為細(xì)胞分化、組織發(fā)育等基礎(chǔ)機(jī)制研究，以及動植物育種、人類健康與疾病研究奠定基礎(chǔ)。DNA甲基化分析是經(jīng)過亞硫酸氫鹽處理后，用PCR擴(kuò)增目的片段，并對PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序.目標(biāo)區(qū)間甲基化重測序哪里好

DNA甲基化主要發(fā)生在啟動子區(qū)CPG島,在調(diào)節(jié)基因表達(dá)和其他功能方面起著關(guān)鍵作用.目標(biāo)區(qū)間甲基化重測序哪里好

DNA甲基化是研究 為普遍的表觀遺傳修飾，它被認(rèn)為在許多生物學(xué)過程和疾病中有著重要的作用。隨著測序技術(shù)的快速發(fā)展，二代測序與重亞硫酸鹽處理基因組DNA相結(jié)合產(chǎn)生了可以在全基因組單堿基水平上測量DNA甲基化水平的全基因組重亞硫酸鹽測序（whole-genome bisulfite sequencing，WGBS）技術(shù)。WGBS的流程與全基因組DNA測序主要區(qū)別于DNA文庫的構(gòu)建。以MethlyC-seq為例，將DNA 段化后收集特定長度的片段并修復(fù)DNA末端，再將雙端加上3′-dAMP然后連接上甲基化的接頭，接著用重亞硫酸鹽處理DNA使未甲基化的胞嘧啶（C）轉(zhuǎn)化為尿嘧啶（U）， 終進(jìn)行低循環(huán)數(shù)的PCR擴(kuò)增后完成建庫，建庫完后上機(jī)測序，得到原始數(shù)據(jù)（fastq文件）后，完成一定的質(zhì)量控制后就可以進(jìn)行mapping分析。目標(biāo)區(qū)間甲基化重測序哪里好

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