上海翼和生物通過亞硫酸氫鹽（bisulfite）處理，用多重PCR擴增目的片段，添加barcode和測序通用接頭，在Illumina X10二代測序平臺對PCR產物進行高通量測序，利用生物信息學方法，精確定量計算目標區間內的甲基化位點的甲基化狀態，在完成目標區域檢測的同時大幅降低研究費用。Hi-MethylSeq結合了亞硫酸鹽轉換、靶向擴增子高通量測序技術，可實現多區段、多位點的甲基化精確定量分析。本方法適用于感興趣的目的片段的甲基化研究，在大樣本中進一步確認全基因組甲基化研究挑選的陽性位點。重亞硫酸鹽處理是甲基化分析中基因組DNA處理的金標準，是一個化學過程，可造成DNA的損傷，很難同時實現100%的轉換效率和保持DNA的完整性，二者需要做出一定的平衡。Hi-MethylSeq在CpG島之外選取3段內參序列中的C作為內對照，準確評估樣本的轉化率。DNA甲基化是在DNA甲基化轉移酶的作用下將甲基選擇性地添加到胞嘧啶上形成5-甲基胞嘧啶（5-mC）的過程。河南CPG島甲基化重測序送樣要求

全基因組甲基化測序結合了亞硫酸氫鹽轉化（bisulfiteconversion）方法與新一代高通量測序技術，可在單堿基分辨率水平上高效地檢測全基因組DNA甲基化狀態。亞硫酸氫鹽處理可以使DNA中未發生甲基化的胞嘧啶脫氨基轉變成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不變，PCR擴增所需片段，則尿嘧啶全部轉化成胸腺嘧啶。對PCR產物進行高通量測序，與參考序列比對，即可判斷CpG/CHG/CHH位點是否發生甲基化。上海翼和生物是上海市遺傳學會理事單位，上海市****，至今已有16年的歷史。北京全基因組甲基化重測序哪個公司做重亞硫酸鹽擴增子測序法基于非甲基化胞嘧啶（C）向尿嘧啶（U）的化學轉化，即用重亞硫酸鹽處理基因組DNA。

DNA甲基化是表觀遺傳學的重要內容。DNA甲基化是基因組DNA的一種主要表觀遺傳修飾形式。DNA甲基化修飾對于維持正常細胞功能、傳遞基因組遺傳印記、胚胎發育以及人類tumour發生，起著至關重要的作用。甲基化研究成為表觀遺傳學的熱點，相應的技術也是層出不窮，根據實驗目的的不同，這些技術大體能夠分成兩類：全基因組甲基化檢測技術以及特異性位點甲基化檢測技術。翼和特色內容目標區域甲基化測序自主知識產權超高重PCR為基礎，目標甲基化區段特異性捕獲，更具針對性，經濟型基于二代測序，可以獲得目標區域內所有C的甲基化數據~500X的測序深度，精確計算每個位點C的甲基化程度通量高，可同時對成百上千個區域進行甲基化程度分析適用于大樣本多區域的DNA甲基化水平檢測Q30＞80%檢出率90%以上，90%以上測序片段測序深度＞10X。

在生物系統內，甲基化是經酶催化的，這種甲基化涉及重金屬修飾、基因表達的調控、蛋白質功能的調節以及核糖核酸(RNA)加工。重金屬修飾可以在生物系統外發生。組織樣本的化學甲基化也是組織染色的方法之一。表觀遺傳學的甲基化包括DNA甲基化或蛋白質甲基化。1）DNA甲基化。脊椎動物的DNA甲基化一般發生在CpG位點（胞嘧啶-磷酸-鳥嘌呤位點，即DNA序列中胞嘧啶后緊連鳥嘌呤的位點）。經DNA甲基轉移酶催化胞嘧啶轉化為5-甲基胞嘧啶。人類基因中約80%-90%的CpG位點已被甲基化，但是在某些特定區域，如富含胞嘧啶和鳥嘌呤的CpG島則未被甲基化。這與包含所有普遍表達基因在內的56%的哺乳動物基因中的啟動子有關。1%-2%的人類基因組是CpG群，并且CpG甲基化與轉錄活性成反比。表觀遺傳學研究已經證實了特定基因區域的DNA甲基化修飾對于染色體構象、基因表達調控機制有著重要影響。

DNA甲基化是**早發現的基因表觀修飾方式之一，真核生物中的甲基化*發生于胞嘧啶，即在DNA甲基化轉移酶（DNMTs）的作用下使CpG二核苷酸5’-端的胞嘧啶轉變為5’-甲基胞嘧啶。DNA甲基化通常抑制基因表達，去甲基化則誘導了基因的重新活化和表達。這種DNA修飾方式在不改變基因序列前提下實現對基因表達的調控。脊椎動物DNA的甲基化狀態與生長發育調控密切相關，比如在tumour發生時，抑cancer基因CpG島以外的CpG序列非甲基化程度增加，CpG島中的CpG則呈高度甲基化狀態，導致抑cancer基因表達的下降。WGBS全稱全基因組重亞硫酸鹽測序，該方法通過Bisulfite處理。杭州多重PCR技術甲基化重測序哪個公司做

亞硫酸氫鹽處理可以使DNA中未發生甲基化的胞嘧啶脫氨基轉變成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不變。河南CPG島甲基化重測序送樣要求

WGBS能為基因組DNA甲基化時空特異性修飾的研究提供重要技術支持，能廣泛應用在個體發育、衰老和疾病等生命過程的機制研究中，也是各物種甲基化圖譜研究的優先方法。常規全基因組甲基化測序技術通過T4-DNA連接酶，在超聲波打斷基因組DNA段的兩端連接接頭序列，連接產物通過重亞硫酸鹽處理將未甲基化修飾的胞嘧啶C轉變為尿嘧啶U，進而通過接頭序列介導的 PCR 技術將尿嘧啶U轉變為胸腺嘧啶T。上海翼和是上海市遺傳學會理事單位，上海市****，至今已有十六年的歷史。河南CPG島甲基化重測序送樣要求

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