DNA甲基化屬于表觀遺傳的范疇。表觀遺傳屬于一種可以對(duì)環(huán)境產(chǎn)生應(yīng)答和改變的遺傳機(jī)制。機(jī)體細(xì)胞在經(jīng)歷脅迫、創(chuàng)傷等環(huán)境變化后,會(huì)產(chǎn)生特定的應(yīng)答,并往往會(huì)用DNA甲基化、組蛋白修飾等形式將應(yīng)激的模式記錄在DNA修飾中。這種脅迫記憶可以幫助細(xì)胞在面臨下一次應(yīng)激的時(shí)候快速適應(yīng)。同時(shí),這種表觀修飾可以通過遺傳的方式傳遞給下一代細(xì)胞。對(duì)于高等動(dòng)植物,通常壽命都比較漫長(zhǎng)。在漫長(zhǎng)的一生中,一方面機(jī)體會(huì)經(jīng)歷大量的環(huán)境應(yīng)答,另一方面細(xì)胞將會(huì)分裂多代。那么機(jī)體就更需要將應(yīng)答的信息,存儲(chǔ)在DNA甲基化中傳遞給后代的細(xì)胞,以提高這個(gè)物種的環(huán)境適應(yīng)能力。亞硫酸氫鹽處理能夠?qū)⒒蚪M中未發(fā)生甲基化的C堿基轉(zhuǎn)換成U,進(jìn)行PCR擴(kuò)增后變成T。江蘇亞硫酸鹽甲基化重測(cè)序哪個(gè)公司做
Hi-Methylseq結(jié)合了亞硫酸鹽轉(zhuǎn)換、靶向擴(kuò)增子高通量測(cè)序技術(shù),可實(shí)現(xiàn)多區(qū)段、多位點(diǎn)的甲基化精確定量分析,適用于感興趣的目的片段的甲基化研究和在大樣本中進(jìn)一步確認(rèn)全基因組甲基化研究挑選的陽性位點(diǎn)。采用翼和自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的多重PCR捕獲技術(shù),確保目的片段有效富集,經(jīng)亞硫酸氫鹽處理后,DNA序列復(fù)雜度嚴(yán)重降低,嚴(yán)格控制建庫PCR的循環(huán)數(shù),降低非特異性擴(kuò)增,通過將參考序列中的C堿基全部替換為T堿基,然后將測(cè)序reads比對(duì)到轉(zhuǎn)換后的參考序列上,針對(duì)每一個(gè)CpG位點(diǎn),統(tǒng)計(jì)C和T堿基的讀數(shù)(類似于SNP calling),來判斷該位點(diǎn)的甲基化。上海亞硫酸鹽甲基化重測(cè)序分析在基因組的某些區(qū)域中,通常位于基因的啟動(dòng)子區(qū),CpG 序列密度很高,可以達(dá)均值的5 倍以上。
DNA甲基化能引起染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、DNA構(gòu)象、DNA穩(wěn)定性及DNA與蛋白質(zhì)相互作用方式的改變,從而控制基因+表達(dá)。在甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下,DNA的CG兩個(gè)核苷酸的胞嘧啶被選擇性地添加甲基,形成5-甲基胞嘧啶,這常見于基因的5'-CG-3'序列。大多數(shù)脊椎動(dòng)物基因組DNA都有少量的甲基化胞嘧啶,主要集中在基因5’端的非編碼區(qū),并成簇存在。甲基化位點(diǎn)可隨DNA的復(fù)制而遺傳,因?yàn)镈NA復(fù)制后,甲基化酶可將新合成的未甲基化的位點(diǎn)進(jìn)行甲基化。DNA的甲基化可引起基因的失活。
DNA甲基化主要發(fā)生在啟動(dòng)子區(qū)CPG島,在調(diào)節(jié)基因表達(dá)和其他功能方面起著關(guān)鍵作用.異常的DNA甲基化可參與調(diào)控疾病相關(guān)的分子信號(hào)通路,從而影響其正常功能。DNA甲基化在生物個(gè)體的生長(zhǎng)發(fā)育與繁殖過程中,維持遺傳物質(zhì)的穩(wěn)定性是至關(guān)重要的。細(xì)胞采用多種機(jī)制來保證DNA復(fù)制的忠實(shí)性,如DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)與半保留復(fù)制模式為遺傳物質(zhì)的穩(wěn)定提供了物質(zhì)基礎(chǔ);DNA聚合酶Ⅲ除了具有DNA聚合酶活性外還具有5’到3’的核酸外切酶活性,可及時(shí)去除錯(cuò)配摻人的堿基;DNA復(fù)制后存在多種修復(fù)機(jī)制進(jìn)一步保證了遺傳物質(zhì)的穩(wěn)定性。DNA甲基化在DNA復(fù)制起始、錯(cuò)配修復(fù)、細(xì)菌中寄主控制的修飾與限制以及轉(zhuǎn)座子的失活等過程中對(duì)維持遺傳信息的穩(wěn)定性發(fā)揮著重要的作用。重亞硫酸氫鈉測(cè)序法(Bisulfite sequencing,BS-Seq)被認(rèn)為是5mC鑒定的金標(biāo)準(zhǔn)。
真核生物基因表達(dá)受多種機(jī)制、多層面的綜合調(diào)控。基因的DNA序列不發(fā)生改變的情況下,基因的表達(dá)水平與功能發(fā)生改變,并可遺傳現(xiàn)象,稱為表觀遺傳(epigenetic)現(xiàn)象。DNA甲基化是指在甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下,DNA的CG二核苷酸中的胞嘧啶被選擇性的添加甲基,形成5-甲基胞嘧啶,常見于基因的5′—CG—3′序列。DNA甲基化的位置主要集中在基因5′端的非編碼區(qū),DNA高度甲基化首先會(huì)影響DNA結(jié)構(gòu),進(jìn)而阻遏基因轉(zhuǎn)錄,引起基因沉默。人體內(nèi),DNA甲基轉(zhuǎn)移酶主要有四種:DNMT1、DNMT3A、DNMT3B和DNMT3L。在DNA復(fù)制完成后,DNMT1是催化甲基轉(zhuǎn)移至新合成的DNA鏈上,這一現(xiàn)象稱為維持甲基化;DNMT3A和DNMT3B負(fù)責(zé)催化核酸鏈上新的甲基化位點(diǎn)發(fā)生反應(yīng),成為形成甲基化;DNMT3L不具有甲級(jí)轉(zhuǎn)移酶活性,其主要作用是調(diào)節(jié)其他甲基轉(zhuǎn)移酶的活性。真核細(xì)胞內(nèi)甲基化狀態(tài)有3種:持續(xù)的低甲基化狀態(tài)(如持家基因的甲基化)、誘導(dǎo)的去甲基化狀態(tài)(如一些發(fā)育階段特異性基因的修飾)和高度甲基化狀態(tài)(如人類女性細(xì)胞內(nèi)縊縮-失活的X染色體的甲基化)。翼和生物目標(biāo)區(qū)域甲基化項(xiàng)目結(jié)合亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化和多重PCR擴(kuò)增建庫測(cè)序技術(shù),對(duì)目標(biāo)區(qū)域甲基化位點(diǎn)進(jìn)行分析。江蘇亞硫酸鹽甲基化重測(cè)序哪個(gè)公司做
全基因組甲基化測(cè)序:利用Bisulfite(亞硫酸鹽)對(duì)基因組進(jìn)行處理后上機(jī)測(cè)序。江蘇亞硫酸鹽甲基化重測(cè)序哪個(gè)公司做
亞硫酸氫鈉轉(zhuǎn)化是分析胞嘧啶甲基化效果比較好的工具之一。該方法基于亞硫酸氫鈉對(duì) DNA 的處理,確定其甲基化模式。重亞硫酸鹽測(cè)序本質(zhì)上就是重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化與二代測(cè)序(NGS)的結(jié)合。甲基化的金標(biāo)準(zhǔn)是亞硫酸氫鹽測(cè)序法:用亞硫酸氫鹽處理DNA,未發(fā)生甲基化的胞嘧啶能夠被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶則保持不變,通過后續(xù)的測(cè)序即可檢測(cè)。利用亞硫酸氫鹽的這種原理,可以衍生出多種甲基化檢測(cè)方法,如甲基化特異性的PCR和高分辨率熔解曲線法。江蘇亞硫酸鹽甲基化重測(cè)序哪個(gè)公司做
上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司是一家第三方檢測(cè)服務(wù);生物專業(yè)領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā)、技術(shù)咨詢、技術(shù)服務(wù);健康衰老評(píng)估;大健康檢測(cè);遺傳學(xué)技術(shù)服務(wù);生物醫(yī)藥行業(yè)質(zhì)控檢測(cè)技術(shù)技術(shù)服務(wù);小鼠遺傳品系鑒定;轉(zhuǎn)基因小鼠基因型鑒定;細(xì)胞點(diǎn)突變檢測(cè);細(xì)胞端粒長(zhǎng)度和端粒酶活性檢測(cè)。的公司,是一家集研發(fā)、設(shè)計(jì)、生產(chǎn)和銷售為一體的專業(yè)化公司。翼和生物作為第三方檢測(cè)服務(wù);生物專業(yè)領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā)、技術(shù)咨詢、技術(shù)服務(wù);健康衰老評(píng)估;大健康檢測(cè);遺傳學(xué)技術(shù)服務(wù);生物醫(yī)藥行業(yè)質(zhì)控檢測(cè)技術(shù)技術(shù)服務(wù);小鼠遺傳品系鑒定;轉(zhuǎn)基因小鼠基因型鑒定;細(xì)胞點(diǎn)突變檢測(cè);細(xì)胞端粒長(zhǎng)度和端粒酶活性檢測(cè)。的企業(yè)之一,為客戶提供良好的細(xì)胞組織小鼠質(zhì)控,大健康檢測(cè),生物技術(shù)服務(wù)。翼和生物不斷開拓創(chuàng)新,追求出色,以技術(shù)為先導(dǎo),以產(chǎn)品為平臺(tái),以應(yīng)用為重點(diǎn),以服務(wù)為保證,不斷為客戶創(chuàng)造更高價(jià)值,提供更優(yōu)服務(wù)。翼和生物創(chuàng)始人陳燁,始終關(guān)注客戶,創(chuàng)新科技,竭誠(chéng)為客戶提供良好的服務(wù)。