圍繞大家關心的CRISPR基因編輯安全性問題，我們首先對CRISPR脫靶位點檢測技術進行一次大盤點，在sgRNA設計階段需要如何做才能夠盡可能地避免脫靶現象的發生。較簡單的脫靶位點檢測方法是全基因組測序（WGS），但在實際使用中，即使測序深度達到100X，也很難發現一些低頻率的脫靶位點，同時測序成本卻非常高。為彌補WGS的這些缺陷，常見的脫靶位點檢測技術都需要對脫靶位點進行捕獲富集，來提高檢測靈敏度，降低測序成本。按照實驗原理的不同，脫靶位點檢測技術可以分為細胞外、細胞內和其他特殊方法這3類。種子脫靶檢測，推薦唯可生物，實驗實力強，專業性高，檢測效率高，結果準確率高。南京種子脫靶檢測安全性評價

自基因zhiliao出現之日起，安全性問題就隨之產生了，并成為阻礙基因zhiliao研發的一大障礙，吳寧博士認為：“基因zhiliao產品的研發和上市，安全性會將是一個非常重要考量。如果一款產品它安全性有問題的話，在市場化道路上就會受到很大影響。尤其是基因zhiliao，目前處于起始階段，一旦出現不良事件，很有可能對整個行業都會產生致命打擊。具體說來，基因zhiliao的安全性問題主要涉及基因插入突變、脫靶、生物分布和持久性、潛伏再jihuo以及潛在免疫原性等。”杭州基因療法脫靶檢測CRO脫靶檢測企業，推薦唯可生物，實驗實力強，專業性高，檢測效率高，結果準確率高。

CRISPR/Cas9的問題：和TALEN和ZFNS技術一樣，CRISPR/Cas9技術在應用時也存在一定概率的脫靶問題——Cas9核酸酶在非目標位點發生切割，引入非預期的基因突變。脫靶切割引入的突變可能會直接破壞細胞的基本功能，帶來不可預控的嚴重后果。如何減輕脫靶效應？gRNA的GC含量：gRNA 的序列結構對CRISPR/Cas9基因編輯的靶向活性有影響。gRNA 序列中 40%–60%的 GC 含量可以增加靶向活性，因為較高的 GC 含量穩定了DNA：RNA 雙鏈體并破壞了脫靶結合。gRNA-on-gRNA序列的位置對編輯有影響，位于四個核苷酸末端的嘌呤殘基可以提高編輯效率。鳥嘌呤優先選擇在gRNA的20位，胞嘧啶優先選擇在16位以增加靶向編輯。

基因編輯產品除了適用基因zhiliao產品的一般考慮以及整合性載體的特殊考慮外，長期隨訪中還應額外關注脫靶風險，量化評估脫靶活性和在靶活性之間的相關性，或利用在靶活性來預測脫靶活性的水平。在開發過程中應同時關注基因轉導效率、脫靶效率、插入突變情況、目的基因在靶細胞中整合位點及表達。評估基因zhiliao產品整合進基因組的可能性，判斷是否需要開展另外的遺傳毒性研究，評估插入突變（插入位點、插入拷貝數等）引起的遺傳毒性風險。需要關注脫靶編輯、轉座子轉座印跡引起的遺傳毒性問題；鑒定/表征基因組整合位點。非臨床研究是藥物開發的重要環節之一。基因療法脫靶檢測，推薦唯可生物，實驗實力強，專業性高，檢測效率高，結果準確率高。

2022年2月下旬，在醫麥客舉辦的年度盛會——“蓄力前行，助航新生——2021 CSGCT基因與細胞zhiliao醫學峰會”期間，唯可生物創始人兼CEO-吳寧博士分享了唯可生物在基因zhiliao賽道針對安全性展開的技術服務，讓在場行業大咖和觀眾真正領會到ISA(integration site analysis，整合位點插入分析)領域國際金標準技術的優勢，以及基因編輯定量脫靶檢測、載體拷貝數檢測、載體質量控制等多項檢測技術的行業意義。吳寧博士畢業于德國海德堡大學，德國國家aizheng研究中心(DKFZ)，并于2021年3月同幾位合伙人聯合創立了上海唯可生物科技有限公司。其創始團隊擁有的檢測技術包括源于DKFZ，Manfred Schmidt團隊的LAM-PCR(linear amplification-mediated Polymerase Chain Reaction，線性擴增陽離子介導的聚合酶鏈反應)，LTA-PCR(Ligation-mediated target amplification Polymerase Chain Reaction，連接介導的目標擴增聚合酶鏈反應)和TES(Target enrichment sequencing，靶向富集測序)體系，并基于此形成的多項全球lingxian的基因zhiliao安全性檢測技術。基因編輯脫靶將無處隱藏。浙江off-target脫靶檢測安全性評價

針對各類脫靶檢測方法存在的問題，開發了一種普遍適用的無偏脫靶識別方法DISCOVER-Seq。南京種子脫靶檢測安全性評價

脫靶來自于這些技術所攜帶的功能基團，如堿基編輯的脫氨酶和先導編輯的逆轉錄酶，不依賴sgRNA結合基因組DNA的情況下產生的脫靶。為檢測第二類脫靶現象，研究者需要針對每種技術設計專門的檢測方法。1) R-loop seq在堿基編輯開發早期，雖然靶位點的編輯效率很高，但研究者也很快發現脫氨酶會在游離的時候隨機修飾暴露的DNA單鏈，導致大量的脫靶位點。為降低這類脫靶現象的發生，研究者設計了R-loop seq，以dSaCas9結合DNA形成R-loop，暴露出DNA單鏈，為堿基編輯的脫氨酶提供一個固定的脫靶位點，然后以該位點的編輯效率反映堿基編輯脫氨酶的脫靶程度。南京種子脫靶檢測安全性評價