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上海唯可生物科技有限公司的研究團(tuán)隊(duì)深知脫靶檢測(cè)的重要性，他們憑借深厚的專業(yè)知識(shí)和豐富的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，在這一領(lǐng)域展開了深入的研究。公司采用了多種先進(jìn)的技術(shù)手段來進(jìn)行脫靶檢測(cè)，其中，全基因組測(cè)序技術(shù)是一項(xiàng)重要的基礎(chǔ)工具。全基因組測(cè)序能夠?qū)ι矬w的整個(gè)基因組進(jìn)行詳細(xì)的測(cè)序分析，通過將編輯后的基因組序列與原始序列進(jìn)行比對(duì)，可以精確地找出那些被意外編輯的脫靶位點(diǎn)。這種方法雖然具有高分辨率的優(yōu)點(diǎn)，能夠檢測(cè)到基因組中的脫靶情況，但也面臨著數(shù)據(jù)量大、分析復(fù)雜等挑戰(zhàn)。上海唯可生物科技有限公司的研究人員通過不斷優(yōu)化數(shù)據(jù)分析算法和流程，提高了全基因組測(cè)序在脫靶檢測(cè)中的效率和準(zhǔn)確性，使其成為公司脫靶檢測(cè)體系中的重要支柱。...

脫靶檢測(cè)是基因編輯領(lǐng)域中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，主要用于評(píng)估基因編輯工具（如CRISPR/Cas9系統(tǒng)）在目標(biāo)基因之外是否產(chǎn)生了非特異性的基因變化。以下是對(duì)脫靶檢測(cè)的詳細(xì)介紹：脫靶檢測(cè)的定義脫靶檢測(cè)是指通過一系列實(shí)驗(yàn)方法，檢測(cè)基因編輯過程中是否在目標(biāo)基因以外的其他基因或基因位點(diǎn)產(chǎn)生了不希望的基因變化。這些變化可能包括單核苷酸突變（SNPs）、插入缺失變異（InDels）等。脫靶檢測(cè)的重要性安全性評(píng)估：脫靶效應(yīng)可能導(dǎo)致不良的生物學(xué)效應(yīng)，如引發(fā)意外的副作用或毒性反應(yīng)。優(yōu)化藥物設(shè)計(jì)：通過脫靶檢測(cè)，可以優(yōu)化基因編輯工具的設(shè)計(jì)，提高其特異性和安全性。風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估：在臨床應(yīng)用前，評(píng)估基因編輯工具的脫靶風(fēng)險(xiǎn)...

如果基因zhiliao產(chǎn)品通過全身給xingfang式遞送，長(zhǎng)期隨訪中的安全性監(jiān)測(cè)不僅包括靶qiguan或靶組織的脫靶活性，而且還應(yīng)包括可能發(fā)生在其他組織和qiguan中的脫靶活性。基因組整合性或者脫靶活性的分析通常需采用有創(chuàng)性12檢測(cè)方法取得樣本，實(shí)施時(shí)還需要考慮技術(shù)和倫理上的可行性，例如靶向視網(wǎng)膜或肝臟等組織的基因zhiliao產(chǎn)品，可能難以對(duì)靶細(xì)胞采樣，這種情況下可能需要通過密切的臨床隨訪等方式間接評(píng)估風(fēng)險(xiǎn)；同時(shí)，選擇易于采樣的替代細(xì)胞也可能提供關(guān)于相關(guān)信息，例如靶向骨髓造血干細(xì)胞的基因zhiliao產(chǎn)品，可以通過采集外周血細(xì)胞或富集外周血干細(xì)胞進(jìn)行觀察。如何檢測(cè)是否發(fā)生脫靶？無錫種子脫...

為了應(yīng)對(duì)脫靶效應(yīng)的挑戰(zhàn)，科學(xué)家們開發(fā)了多種脫靶檢測(cè)技術(shù)。這些技術(shù)旨在識(shí)別和驗(yàn)證基因編輯過程中可能發(fā)生的脫靶位點(diǎn)，從而確保基因編輯技術(shù)的安全性和有效性。生物信息學(xué)方法是一種常用的脫靶位點(diǎn)預(yù)測(cè)技術(shù)。通過比較gRNA或MicroRNA序列與基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中的序列，可以預(yù)測(cè)潛在的脫靶位點(diǎn)。常用的生物信息學(xué)工具包括miRanda、DIANA-microT、Targetscan和PicTar等。這些工具利用算法評(píng)估gRNA或MicroRNA序列與基因組序列之間的匹配程度，從而預(yù)測(cè)可能的脫靶位點(diǎn)。然而，生物信息學(xué)方法具有一定的局限性。由于基因組序列的復(fù)雜性和多樣性，預(yù)測(cè)結(jié)果可能存在一定的假陽性和假陰性。因此，...

在基因編輯技術(shù)蓬勃發(fā)展的時(shí)代，人類仿佛獲得了一把能夠重塑生命密碼的神奇鑰匙。從基礎(chǔ)科研對(duì)基因功能的深度探索，到生物制藥領(lǐng)域?qū)σ呻y病癥的突破嘗試，基因編輯技術(shù)正以前所未有的速度改變著生物醫(yī)學(xué)的格局。然而，如同每一枚硬幣都有兩面，基因編輯技術(shù)在帶來無限可能的同時(shí)，也隱藏著一個(gè)不容忽視的隱患——脫靶效應(yīng)。上海唯可生物科技有限公司，作為一家專注于生物技術(shù)前沿研究與應(yīng)用的企業(yè)，敏銳地捕捉到了這一關(guān)鍵問題，并投身于脫靶檢測(cè)領(lǐng)域，為基因編輯技術(shù)的安全應(yīng)用筑牢防線。種子基因脫靶檢測(cè)機(jī)構(gòu)推薦唯可。蘇州off-target脫靶檢測(cè)政策不論在科研還是臨床中，CRISPR技術(shù)的使用都帶來了非常高的回報(bào)，也同時(shí)伴隨著各...

脫靶效應(yīng)對(duì)基因編輯技術(shù)的安全性和有效性構(gòu)成了嚴(yán)重威脅。首先，脫靶編輯可能導(dǎo)致意外的基因突變，進(jìn)而引發(fā)疾病或遺傳問題。其次，脫靶效應(yīng)可能干擾正常基因的功能，導(dǎo)致細(xì)胞功能障礙或死亡。此外，脫靶效應(yīng)還可能影響基因編輯技術(shù)的準(zhǔn)確度和可靠性，使得實(shí)驗(yàn)結(jié)果難以解釋和重復(fù)。在生物醫(yī)學(xué)研究中，脫靶效應(yīng)還可能引發(fā)倫理和法律問題。例如，如果基因編輯技術(shù)導(dǎo)致意外的基因突變，這可能引發(fā)對(duì)人類遺傳信息的不可預(yù)知改變，從而引發(fā)倫理爭(zhēng)議。此外，脫靶效應(yīng)還可能影響基因編輯技術(shù)的臨床應(yīng)用，使得其在疾病干預(yù)和基因療法中的應(yīng)用受到限制。隨著脫靶影響因素、降低策略及脫靶檢測(cè)技術(shù)研究的不斷深入，未來CRISPR/Cas9系統(tǒng)將在更多領(lǐng)...

Cas9蛋白是一種切割外來DNA的酶，像一把分子剪刀。該蛋白通常與兩個(gè)RNA分子結(jié)合：crRNA和另一個(gè)稱為tracrRNA（或“反式j(luò)ihuocrRNA”）。這兩個(gè)RNA分子引導(dǎo)Cas9到它將進(jìn)行切割的目標(biāo)部位。這段DNA是與crRNA的20個(gè)核苷酸互補(bǔ)的。CRISPR技術(shù)是從細(xì)菌和古細(xì)菌的自然防御機(jī)制中改編而來的。這些生物體使用CRISPR衍生的RNA和各種Cas蛋白，包括Cas9，來阻止病毒和其他異物的攻擊。它們主要通過切碎和破壞外來入侵者的DNA來做到這一點(diǎn)。當(dāng)這些組件被轉(zhuǎn)移到其他更復(fù)雜的生物體中時(shí)，它允許對(duì)基因進(jìn)行操縱，或“編輯”。脫靶檢測(cè)方法，推薦唯可生物，實(shí)驗(yàn)實(shí)力強(qiáng)，專業(yè)性高，檢...

Guide-seq原理圖，Discover-seq細(xì)胞內(nèi)的脫靶切割一般無法直接捕獲，除了Guide-seq這種連接dsODN來間接記錄脫靶位點(diǎn)的方法外，研究者們還想出一種蛋白介導(dǎo)的方法Discover-seq。由于DNA雙鏈斷裂后細(xì)胞會(huì)啟動(dòng)DNA修復(fù)機(jī)制，大量蛋白參與到斷裂處的修復(fù)，所以研究者就對(duì)相關(guān)蛋白進(jìn)行篩選，找到其中MRE11結(jié)合DNA的位點(diǎn)與DNA雙鏈斷裂的相關(guān)性比較好。DISCOVER-seq便是通過MRE11的CHIP-seq（染色質(zhì)免疫共沉淀）來反映CRISPR的脫靶位點(diǎn)。。。。脫靶檢測(cè)在揭示CRISPR/Cas9系統(tǒng)的脫靶機(jī)制以及進(jìn)一步提高系統(tǒng)靶向性的研究中具有重要作用。江蘇基...

脫靶檢測(cè)的應(yīng)用5.1 基因編輯工具開發(fā)在新編輯工具開發(fā)過程中，脫靶檢測(cè)是評(píng)估工具特異性的關(guān)鍵步驟。通過比較不同工具的脫靶譜，可以篩選出高特異性編輯系統(tǒng)。5.2 基因編輯實(shí)驗(yàn)優(yōu)化在具體實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中，脫靶檢測(cè)可以幫助選擇特異性高的gRNA序列，優(yōu)化編輯條件，降低脫靶風(fēng)險(xiǎn)。5.3 安全性評(píng)估對(duì)于基因編輯技術(shù)的應(yīng)用，特別是涉及臨床應(yīng)用的研究，脫靶檢測(cè)是安全性評(píng)估的重要組成部分。當(dāng)前脫靶檢測(cè)技術(shù)仍面臨一些挑戰(zhàn)。部分方法靈敏度有限，難以檢測(cè)低頻脫靶事件；一些體內(nèi)檢測(cè)方法操作復(fù)雜，成本較高；生物信息學(xué)預(yù)測(cè)工具的準(zhǔn)確性有待提高。脫靶檢測(cè)簡(jiǎn)單有效的方法之一是全基因組測(cè)序法。無錫定量脫靶檢測(cè)政策GUIDE-Seq和...

脫靶檢測(cè)是基因編輯領(lǐng)域中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，主要用于評(píng)估基因編輯工具（如CRISPR/Cas9系統(tǒng)）在目標(biāo)基因之外是否產(chǎn)生了非特異性的基因變化。以下是對(duì)脫靶檢測(cè)的詳細(xì)介紹：脫靶檢測(cè)的定義脫靶檢測(cè)是指通過一系列實(shí)驗(yàn)方法，檢測(cè)基因編輯過程中是否在目標(biāo)基因以外的其他基因或基因位點(diǎn)產(chǎn)生了不希望的基因變化。這些變化可能包括單核苷酸突變（SNPs）、插入缺失變異（InDels）等。脫靶檢測(cè)的重要性安全性評(píng)估：脫靶效應(yīng)可能導(dǎo)致不良的生物學(xué)效應(yīng)，如引發(fā)意外的副作用或毒性反應(yīng)。優(yōu)化藥物設(shè)計(jì)：通過脫靶檢測(cè)，可以優(yōu)化基因編輯工具的設(shè)計(jì)，提高其特異性和安全性。風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估：在臨床應(yīng)用前，評(píng)估基因編輯工具的脫靶風(fēng)險(xiǎn)...

為了應(yīng)對(duì)脫靶效應(yīng)的挑戰(zhàn)，科學(xué)家們開發(fā)了多種脫靶檢測(cè)技術(shù)。這些技術(shù)旨在識(shí)別和驗(yàn)證基因編輯過程中可能發(fā)生的脫靶位點(diǎn)，從而確保基因編輯技術(shù)的安全性和有效性。生物信息學(xué)方法是一種常用的脫靶位點(diǎn)預(yù)測(cè)技術(shù)。通過比較gRNA或MicroRNA序列與基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中的序列，可以預(yù)測(cè)潛在的脫靶位點(diǎn)。常用的生物信息學(xué)工具包括miRanda、DIANA-microT、Targetscan和PicTar等。這些工具利用算法評(píng)估gRNA或MicroRNA序列與基因組序列之間的匹配程度，從而預(yù)測(cè)可能的脫靶位點(diǎn)。然而，生物信息學(xué)方法具有一定的局限性。由于基因組序列的復(fù)雜性和多樣性，預(yù)測(cè)結(jié)果可能存在一定的假陽性和假陰性。因此，...

脫靶效應(yīng)可能帶來一系列嚴(yán)重的后果。在生物科研領(lǐng)域，如果在進(jìn)行基因功能研究時(shí)出現(xiàn)脫靶，可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，使科研人員對(duì)基因功能的理解出現(xiàn)偏差，進(jìn)而影響后續(xù)的研究方向和成果。例如，在研究某個(gè)發(fā)生相關(guān)的基因時(shí)，若因脫靶效應(yīng)導(dǎo)致其他無關(guān)基因被意外編輯，可能會(huì)讓科研人員誤以為這些無關(guān)基因有直接關(guān)聯(lián)，從而浪費(fèi)大量的時(shí)間和資源進(jìn)行錯(cuò)誤的研究。在生物制藥領(lǐng)域，脫靶效應(yīng)的危害更為直接和嚴(yán)重。當(dāng)基因編輯技術(shù)應(yīng)用于藥物研發(fā)或基因時(shí)，脫靶可能會(huì)導(dǎo)致不可預(yù)測(cè)的基因突變，引發(fā)細(xì)胞的異常增殖、免疫反應(yīng)等，甚至可能誘發(fā)新的疾病。一些基因臨床試驗(yàn)中出現(xiàn)的嚴(yán)重不良反應(yīng)，就有可能與脫靶效應(yīng)密切相關(guān)。因此，開發(fā)有效的脫靶檢測(cè)技...

基因編輯產(chǎn)品除了適用基因zhiliao產(chǎn)品的一般考慮以及整合性載體的特殊考慮外，長(zhǎng)期隨訪中還應(yīng)額外關(guān)注脫靶風(fēng)險(xiǎn)，量化評(píng)估脫靶活性和在靶活性之間的相關(guān)性，或利用在靶活性來預(yù)測(cè)脫靶活性的水平。在開發(fā)過程中應(yīng)同時(shí)關(guān)注基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率、脫靶效率、插入突變情況、目的基因在靶細(xì)胞中整合位點(diǎn)及表達(dá)。評(píng)估基因zhiliao產(chǎn)品整合進(jìn)基因組的可能性，判斷是否需要開展另外的遺傳毒性研究，評(píng)估插入突變（插入位點(diǎn)、插入拷貝數(shù)等）引起的遺傳毒性風(fēng)險(xiǎn)。需要關(guān)注脫靶編輯、轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)座印跡引起的遺傳毒性問題；鑒定/表征基因組整合位點(diǎn)。非臨床研究是藥物開發(fā)的重要環(huán)節(jié)之一。脫靶檢測(cè)評(píng)估，推薦唯可生物，實(shí)驗(yàn)實(shí)力強(qiáng)，專業(yè)性高，檢測(cè)效率高，...

臨床研究人群，如果一種基因zhiliao產(chǎn)品具有引起遲發(fā)性不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)，需要開展長(zhǎng)期隨訪觀察時(shí)，所有接受基因zhiliao產(chǎn)品的受試者在簽署知情同意書后均應(yīng)入組長(zhǎng)期隨訪臨床研究。在設(shè)計(jì)長(zhǎng)期隨訪臨床研究的方案時(shí)，應(yīng)考慮目標(biāo)受試者人群及特征、整體健康情況以及接受zhiliao的患者的預(yù)期生存期等特征對(duì)遲發(fā)性不良反應(yīng)的收集的影響。通常來說，當(dāng)臨床研究人群的某些特征（如預(yù)期壽命短、多重合并癥、以及暴露于放療或化療等其他藥物）可能干擾遲發(fā)性不良反應(yīng)的觀察分析時(shí)，會(huì)影響長(zhǎng)期隨訪觀察在評(píng)估和減輕受試者風(fēng)險(xiǎn)方面的效用；而在病情較輕或較局限，合并癥以及伴隨zhiliao有限或較穩(wěn)定的受試者中，通過長(zhǎng)期隨訪觀察...

堿基編輯器：CBE：胞嘧啶堿基編輯器(Cytosine base editor，CBE)，依賴于胞嘧啶核苷脫氨基酶，通過將胞嘧啶核苷脫氨轉(zhuǎn)換為尿嘧啶核苷，尿嘧啶核苷在DNA復(fù)制和修復(fù)過程中會(huì)轉(zhuǎn)換為胸腺嘧啶核苷，從而實(shí)現(xiàn)C到T的轉(zhuǎn)換。已開發(fā)出四代CBE（BE1、BE2、BE3和BE4），由于BE3引起的脫靶效應(yīng)相對(duì)較少，因此它已在動(dòng)物（小鼠）、細(xì)菌和植物細(xì)胞中廣用于編輯細(xì)胞的基因組成。腺嘌呤堿基編輯器(Adenine base editor，ABE)，依賴于腺嘌呤核苷脫氨基酶，通過將腺嘌呤核苷脫氨轉(zhuǎn)換為次黃苷，然后在DNA復(fù)制和修復(fù)過程中會(huì)轉(zhuǎn)換為鳥嘌呤核苷，從而實(shí)現(xiàn)腺嘌呤(A)到鳥嘌呤(G)的轉(zhuǎn)...

如果基因zhiliao產(chǎn)品通過全身給xingfang式遞送，長(zhǎng)期隨訪中的安全性監(jiān)測(cè)不僅包括靶qiguan或靶組織的脫靶活性，而且還應(yīng)包括可能發(fā)生在其他組織和qiguan中的脫靶活性。基因組整合性或者脫靶活性的分析通常需采用有創(chuàng)性12檢測(cè)方法取得樣本，實(shí)施時(shí)還需要考慮技術(shù)和倫理上的可行性，例如靶向視網(wǎng)膜或肝臟等組織的基因zhiliao產(chǎn)品，可能難以對(duì)靶細(xì)胞采樣，這種情況下可能需要通過密切的臨床隨訪等方式間接評(píng)估風(fēng)險(xiǎn)；同時(shí)，選擇易于采樣的替代細(xì)胞也可能提供關(guān)于相關(guān)信息，例如靶向骨髓造血干細(xì)胞的基因zhiliao產(chǎn)品，可以通過采集外周血細(xì)胞或富集外周血干細(xì)胞進(jìn)行觀察。脫靶檢測(cè)評(píng)估，推薦唯可生物，實(shí)驗(yàn)...

R-loop seq雖然不是一種真正意義上的脫靶位點(diǎn)檢測(cè)方法，但能為堿基編輯脫氨酶的脫靶提供一種度量方法，以便于之后的脫氨酶點(diǎn)突變優(yōu)化，來降低脫靶的發(fā)生幾率。2) Detect-seqCRISPR衍生技術(shù)由于其復(fù)雜性，檢測(cè)其脫靶位點(diǎn)的hexin思路是捕獲實(shí)驗(yàn)過程中的關(guān)鍵中間產(chǎn)物或者終產(chǎn)物。這種設(shè)計(jì)思路下，目前較為成功的是檢測(cè)堿基編輯CBE脫靶位點(diǎn)的Detect-seq[13]。CBE的原理是將dC脫氨變?yōu)閐U，迫使其對(duì)側(cè)的dG變?yōu)閐A，較終將堿基對(duì)從C-G轉(zhuǎn)變?yōu)門-A。Detect-seq便是針對(duì)中間態(tài)的dU，使用Uracil DNA Glycosylase (UDG)，去除U堿基后，替換為帶...

采用基因編輯技術(shù)制備的細(xì)胞產(chǎn)品。對(duì)于采用基因編輯技術(shù)制備的基因修飾細(xì)胞產(chǎn)品，應(yīng)進(jìn)行體外在靶和脫靶活性評(píng)估，以確認(rèn)修飾酶或向?qū)NA對(duì)靶基因序列的特異性。在評(píng)估基因編輯的脫靶風(fēng)險(xiǎn)時(shí)，應(yīng)說明所選擇的評(píng)價(jià)策略的合理性和敏感性。雖然采用計(jì)算機(jī)分析預(yù)測(cè)基因編輯的潛在脫靶位點(diǎn)，并對(duì)潛在脫靶位點(diǎn)進(jìn)行深度測(cè)序分析，可用于評(píng)估基因編輯的脫靶風(fēng)險(xiǎn)；但選擇的評(píng)價(jià)策略仍應(yīng)包含體外全基因組測(cè)序比對(duì)，以證明潛在脫靶位點(diǎn)未出現(xiàn)脫靶。此外，在評(píng)估脫靶活性時(shí)，還應(yīng)評(píng)估種屬特異性的差異、細(xì)胞病理生理狀態(tài)的差異或細(xì)胞類型的差異對(duì)非臨床數(shù)據(jù)預(yù)測(cè)性的影響。必要時(shí)，還應(yīng)分析基因編輯對(duì)細(xì)胞表型和生理功能的潛在影響。crispr脫靶檢測(cè)，推...

gRNA的長(zhǎng)度和錯(cuò)配： 17個(gè)核苷酸長(zhǎng)度的gRNA顯示出更高的基因組編輯效率。相比之下，18-20 bp的長(zhǎng)度顯示出較低的基因組編輯效率。在人類細(xì)胞中減少潛在脫靶效應(yīng)的指導(dǎo)方針：1) 應(yīng)避免在PAM的7-10 bp范圍內(nèi)靶序列有超過3個(gè)錯(cuò)配；2) 在PAM的12 bp內(nèi)，應(yīng)避免sgRNA 凸起以減少脫靶效應(yīng)。gRNA的化學(xué)修飾：在gRNA核糖磷酸骨架中加入2?-O-甲基-3?-膦酰基乙酸酯會(huì)導(dǎo)致位點(diǎn)特異性修飾，使脫靶切割減少40-120倍，同時(shí)保持靶向性能。gRNA上游5'發(fā)夾結(jié)構(gòu)的修飾可以提高Cas9和Cas12的特異性，降低脫靶效應(yīng)。脫靶檢測(cè)技術(shù)，推薦唯可生物，實(shí)驗(yàn)實(shí)力強(qiáng)，專業(yè)性高，檢測(cè)效...

CRISPR基于sgRNA與基因組序列互補(bǔ)定位到靶位點(diǎn)，不論哪種CRISPR系統(tǒng)，都存在sgRNA序列不完全匹配但能夠結(jié)合基因組的脫靶現(xiàn)象，CRISPR定位到脫靶位點(diǎn)引發(fā)序列改變就屬于第二類風(fēng)險(xiǎn)。CRISPR技術(shù)誕生剛過10年，期間迅速取代TALEN和ZFN，成為學(xué)術(shù)界通用的基因編輯技術(shù)，也徹底改變了我們的生物學(xué)研究方法。為提高CRISPR技術(shù)的安全性，特別是往臨床應(yīng)用發(fā)展時(shí)的安全性問題，研究者們一直以提高靶位點(diǎn)的編輯效率和準(zhǔn)確性，同時(shí)降低脫靶位點(diǎn)編輯發(fā)生概率為目標(biāo)，來優(yōu)化CRISPR技術(shù)。另一方面，研究者們也開發(fā)了大量檢測(cè)方法，用于檢測(cè)CRISPR的靶向風(fēng)險(xiǎn)和脫靶風(fēng)險(xiǎn)，用于早期sgRNA序列...

CIRCLE-Seq，將gDNA打斷并環(huán)化，環(huán)化的DNA與CRISPR/RNP孵育，NGS測(cè)序檢測(cè)線性化的DNapian段，確定脫靶位點(diǎn)。PCR富集后測(cè)序，成本相對(duì)較低，能檢測(cè)低頻脫靶突變。安必奇sgRNA脫靶效應(yīng)評(píng)估，安必奇生物提供sgRNA脫靶效應(yīng)評(píng)估服務(wù)，幫助您挑選高度特異，脫靶率低的sgRNA進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。同時(shí)，我們也協(xié)助您檢測(cè)分析基因編輯后細(xì)胞樣品的脫靶情況，通過各種高通量測(cè)序檢測(cè)技術(shù)，我們能準(zhǔn)確的分析全基因組范圍內(nèi)的脫靶位點(diǎn)，推動(dòng)CRISPR/Cas9技術(shù)在zhiliao藥物開發(fā)和臨床研究中的應(yīng)用。我們的優(yōu)勢(shì)：靈敏度高：能檢測(cè)低頻脫靶突變★準(zhǔn)確性高：檢測(cè)結(jié)果可通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證★多種檢測(cè)...

但是由于CHIP-seq實(shí)驗(yàn)本身的難度較高，DISCOVER-seq這類方法的接受度并不高。3. 其他特殊方法CRISPR技術(shù)經(jīng)過這么多年的發(fā)展，其應(yīng)用已經(jīng)不局限于造成DNA雙鏈斷裂，一些不要切割DNA雙鏈的CRISPR衍生技術(shù)（如堿基編輯、先導(dǎo)編輯和CRISPRi/a），可以在不引發(fā)隨機(jī)突變的情況下，對(duì)基因組進(jìn)行精細(xì)編輯或者調(diào)控。這些技術(shù)所使用nCas9或dCas9只結(jié)合或者切割雙鏈中的一條鏈，之前的脫靶檢測(cè)方法都不能直接適用。這些CRISPR衍生技術(shù)中，CRISPR產(chǎn)生的脫靶可以被細(xì)分為兩個(gè)部分，其一是Cas9/sgRNA結(jié)合DNA導(dǎo)致的脫靶，這部分信息使用同樣序列的sgRNA進(jìn)行野生型C...

2022年2月下旬，在醫(yī)麥客舉辦的年度盛會(huì)——“蓄力前行，助航新生——2021 CSGCT基因與細(xì)胞zhiliao醫(yī)學(xué)峰會(huì)”期間，唯可生物創(chuàng)始人兼CEO-吳寧博士分享了唯可生物在基因zhiliao賽道針對(duì)安全性展開的技術(shù)服務(wù)，讓在場(chǎng)行業(yè)大咖和觀眾真正領(lǐng)會(huì)到ISA(integration site analysis，整合位點(diǎn)插入分析)領(lǐng)域國(guó)際金標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)的優(yōu)勢(shì)，以及基因編輯定量脫靶檢測(cè)、載體拷貝數(shù)檢測(cè)、載體質(zhì)量控制等多項(xiàng)檢測(cè)技術(shù)的行業(yè)意義。吳寧博士畢業(yè)于德國(guó)海德堡大學(xué)，德國(guó)國(guó)家aizheng研究中心(DKFZ)，并于2021年3月同幾位合伙人聯(lián)合創(chuàng)立了上海唯可生物科技有限公司。其創(chuàng)始團(tuán)隊(duì)擁有的檢測(cè)...

CRISPR基于sgRNA與基因組序列互補(bǔ)定位到靶位點(diǎn)，不論哪種CRISPR系統(tǒng)，都存在sgRNA序列不完全匹配但能夠結(jié)合基因組的脫靶現(xiàn)象，CRISPR定位到脫靶位點(diǎn)引發(fā)序列改變就屬于第二類風(fēng)險(xiǎn)。CRISPR技術(shù)誕生剛過10年，期間迅速取代TALEN和ZFN，成為學(xué)術(shù)界通用的基因編輯技術(shù)，也徹底改變了我們的生物學(xué)研究方法。為提高CRISPR技術(shù)的安全性，特別是往臨床應(yīng)用發(fā)展時(shí)的安全性問題，研究者們一直以提高靶位點(diǎn)的編輯效率和準(zhǔn)確性，同時(shí)降低脫靶位點(diǎn)編輯發(fā)生概率為目標(biāo)，來優(yōu)化CRISPR技術(shù)。另一方面，研究者們也開發(fā)了大量檢測(cè)方法，用于檢測(cè)CRISPR的靶向風(fēng)險(xiǎn)和脫靶風(fēng)險(xiǎn)，用于早期sgRNA序列...

細(xì)胞經(jīng)基因修飾后會(huì)改變其生物學(xué)特性，同時(shí)也會(huì)帶來新的安全性風(fēng)險(xiǎn)，如基因編輯脫靶風(fēng)險(xiǎn)、載體插入突變風(fēng)險(xiǎn)、載體重組風(fēng)險(xiǎn)、表達(dá)的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物的風(fēng)險(xiǎn)等。在制定非臨床研究計(jì)劃時(shí)，除參考《細(xì)胞zhilliao產(chǎn)品研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則》（試行）中的對(duì)細(xì)胞zhilliao產(chǎn)品的一般要求外，還應(yīng)具體問題具體分析，基于產(chǎn)品特點(diǎn)和目前已有的科學(xué)認(rèn)知，結(jié)合擬定適應(yīng)癥、患者人群、給藥途徑和給yaofang案等方面的考慮，科學(xué)合理的設(shè)計(jì)和實(shí)施非臨床研究，充分表征產(chǎn)品的藥理學(xué)、毒理學(xué)和藥代動(dòng)力學(xué)特征。在進(jìn)行獲益風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估時(shí)，還應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注由非臨床向臨床過渡時(shí)非臨床研究的局限性和風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)的不確定性。脫靶檢測(cè)安全性評(píng)價(jià)，推薦唯可生...

CRISPR/Cas系統(tǒng)是細(xì)菌和古細(xì)菌在不斷進(jìn)化的過程中產(chǎn)生的適應(yīng)性免疫防御機(jī)制，它應(yīng)用CRISPR RNA（crRNA）以堿基互補(bǔ)的形式引導(dǎo)相應(yīng)的Cas蛋白識(shí)別入侵的外源基因組，并對(duì)其DNA進(jìn)行剪切，用以保護(hù)自身的基因組免受外源核酸如噬菌體、病毒等的干擾和破壞。經(jīng)過人為改造后，可在真核細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)高度靈活且特異的基因組編輯，通過設(shè)計(jì)特異性向?qū)NA(Single guide RNA, sgRNA)序列與靶序列進(jìn)行堿基配對(duì)，從而引導(dǎo)Cas蛋白結(jié)合到靶序列處，行使DNA切割功能，然后利用細(xì)胞的非同源性末端連接(Non-homologous end joining, NHEJ)或同源重組(Homol...

脫靶來自于這些技術(shù)所攜帶的功能基團(tuán)，如堿基編輯的脫氨酶和先導(dǎo)編輯的逆轉(zhuǎn)錄酶，不依賴sgRNA結(jié)合基因組DNA的情況下產(chǎn)生的脫靶。為檢測(cè)第二類脫靶現(xiàn)象，研究者需要針對(duì)每種技術(shù)設(shè)計(jì)專門的檢測(cè)方法。1) R-loop seq在堿基編輯開發(fā)早期，雖然靶位點(diǎn)的編輯效率很高，但研究者也很快發(fā)現(xiàn)脫氨酶會(huì)在游離的時(shí)候隨機(jī)修飾暴露的DNA單鏈，導(dǎo)致大量的脫靶位點(diǎn)。為降低這類脫靶現(xiàn)象的發(fā)生，研究者設(shè)計(jì)了R-loop seq，以dSaCas9結(jié)合DNA形成R-loop，暴露出DNA單鏈，為堿基編輯的脫氨酶提供一個(gè)固定的脫靶位點(diǎn)，然后以該位點(diǎn)的編輯效率反映堿基編輯脫氨酶的脫靶程度。選擇潛在的脫靶位點(diǎn)，例如選擇gRNA...

CRISPR基于sgRNA與基因組序列互補(bǔ)定位到靶位點(diǎn)，不論哪種CRISPR系統(tǒng)，都存在sgRNA序列不完全匹配但能夠結(jié)合基因組的脫靶現(xiàn)象，CRISPR定位到脫靶位點(diǎn)引發(fā)序列改變就屬于第二類風(fēng)險(xiǎn)。CRISPR技術(shù)誕生剛過10年，期間迅速取代TALEN和ZFN，成為學(xué)術(shù)界通用的基因編輯技術(shù)，也徹底改變了我們的生物學(xué)研究方法。為提高CRISPR技術(shù)的安全性，特別是往臨床應(yīng)用發(fā)展時(shí)的安全性問題，研究者們一直以提高靶位點(diǎn)的編輯效率和準(zhǔn)確性，同時(shí)降低脫靶位點(diǎn)編輯發(fā)生概率為目標(biāo)，來優(yōu)化CRISPR技術(shù)。另一方面，研究者們也開發(fā)了大量檢測(cè)方法，用于檢測(cè)CRISPR的靶向風(fēng)險(xiǎn)和脫靶風(fēng)險(xiǎn)，用于早期sgRNA序列...

插入突變風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估一些整合性載體（如逆轉(zhuǎn)錄病毒、慢病毒、轉(zhuǎn)座子）可將外源基因插入整合到細(xì)胞基因組中，這可能會(huì)導(dǎo)致關(guān)鍵基因突變或jihuo原基因，從而導(dǎo)致惡性liu風(fēng)險(xiǎn)增加。影響插入突變的關(guān)鍵風(fēng)險(xiǎn)因素包括：（1）載體的整合特征，如插入位點(diǎn)的偏好性；（2）載體的設(shè)計(jì)，如增強(qiáng)子、啟動(dòng)子等構(gòu)建元件的活性，影響鄰近基因的潛力；產(chǎn)生剪接突變體的潛在剪接位點(diǎn)或多聚腺苷酸信號(hào)等；（3）細(xì)胞載體拷貝數(shù)；4）轉(zhuǎn)基因表達(dá)產(chǎn)物的功能活性（如與細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)控相關(guān)）和表達(dá)水平；5）靶細(xì)胞群的轉(zhuǎn)化可能性，這可能與細(xì)胞的分化狀態(tài)、增殖潛力、體外培養(yǎng)條件和體內(nèi)植入環(huán)境等有關(guān)。如何檢測(cè)是否發(fā)生脫靶? 基因編輯的脫靶率檢測(cè)一般有兩種方...

長(zhǎng)期表達(dá)。與其他產(chǎn)品相比，部分基因zhiliao產(chǎn)品的明顯特征是可以在患者靶細(xì)胞或基因修飾細(xì)胞中持續(xù)存在并編碼表達(dá)作用因子（功能性蛋白或基因表達(dá)調(diào)節(jié)元件），并通過長(zhǎng)久或長(zhǎng)期改變靶細(xì)胞或組織的功能來達(dá)到zhiliao效果。同時(shí)，由于基因zhiliao編碼的作用因子在體內(nèi)的長(zhǎng)期暴露或表達(dá)異常，可能產(chǎn)生與其功能相關(guān)的長(zhǎng)期安全性風(fēng)險(xiǎn)，如細(xì)胞生長(zhǎng)失控和惡性liu形成、自身免疫反應(yīng)或其他無法預(yù)測(cè)的遲發(fā)性不良反應(yīng)。潛伏再jihuo。部分病毒類基因zhiliao產(chǎn)品可能存在從潛伏期被再jihuo的可能性或者引起機(jī)體中已有病毒ganran的再jihuo，存在ganran相關(guān)的遲發(fā)性不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)。脫靶檢測(cè)評(píng)估，...